维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对Bel/Fu细胞株多药耐药性及mRNA表达的影响(一)

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作者：玛依努尔・艾力,哈木拉提・吾甫尔,阿不力孜,伊力哈木

【摘要】 目的 研究异常黑胆质成熟剂总黄酮对肝癌Bel/Fu细胞株多药耐药性(MDR)及mRNA表达的影响。方法 逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内MDR1、MRP、GST-π、TopoⅡα mRNA的表达。结果 异常黑胆质成熟剂总黄酮可抑制人肝癌Bel/Fu细胞株MDR1 mRNA的表达,提高TopoⅡαmRNA水平。结论 异常黑胆质成熟剂总黄酮抑制MDR1 mRNA的表达、提高TopoⅡαmRNA水平是其逆转肝癌MDR的机制。

【关键词】 维药；Bel/Fu细胞株；多药耐药性；逆转录聚合酶链式反应法；异常黑胆质成熟剂总黄酮

　　Abstract：Objective To study the effect of Abnormal Savda Munziq (ASMq) on MDR and expression of mRNA of Bel/Fu cell line. Methods Several genes expression including MDR1, MRP, TOPOIIα and GST-π were analyzed by RT-PCR. Results ASMq has been found to down-regulate MDR1 gene and simultaneously up-regulate TopoⅡαmRNA. Conclusion ASMq can reverse the drug resistance against 5-Fu in Bel/Fu cells. Inhibition of MDR1 mRNA and up-regulate TopoⅡα mRNA may contribute to the mechanisms.

　　Key words：Uighur medicine；Bel/Fu cell line；MDR；RT-PCR；ASMq

本实验选用肝癌耐药细胞株Bel/Fu作为研究对象,对维药异常黑胆质成熟剂总黄酮(ASMq)逆转肝癌多药耐药性(MDR)与相关分子机制进行了研究,旨在寻找一种新型具有MDR逆转作用的药物。

　　1 实验材料

　　9700型PCR扩增仪；Kodak凝胶电泳成像分析系统(EDAS)；肝癌细胞株Bel/Fu(南京凯基生物公司产品)；ASMq,新疆维吾尔医研究所提供；5-氟尿嘧啶(5-Fu),扬州奥赛康药业有限公司产品；逆转录酶AMV(Gibco/BRL公司)；Tripure试剂(Gibco/BRL公司)；Taq酶(宝泰克公司)；特异性引物(Takara公司合成)。

　　2 实验方法

　　2.1 MTT法测定细胞毒

　　用0.25%胰酶消化处理对数生长期细胞,用含质量分数为10%胎牛血清的RPMI-1640培养液配成密度为3×103个细胞/mL单细胞悬液,接种于96孔培养板中,每孔体积200 μL,待细胞贴壁后,分成5组。ASMq组加5 μL ASMq,其浓度为300、320、340、350、360、380、390、400、460 μg/mL；ASMq＋5-Fu组,在ASMq组的基础上加入5 μL 5-Fu(浓度为0.02 μg/mL)；细胞对照组不加药物；5-Fu组每孔仅加入5 μL 5-Fu(浓度为0.02 μg/mL)；空白组于37 ℃体积分数为5%的CO2中培养4 d后,向每孔加入50 μL MTT(1mg/mL),继续培养4 h,移去上清后,每孔再加入150 μL DMSO,振荡10 min后,用酶标仪测定OD570 nm 值。用下式计算细胞存活率及逆转倍数。

　　细胞存活率(%)＝剂量组OD490平均值－空白组OD490平均值

　　阴性对照组OD490平均值－空白组OD490平均值

　　逆转倍数＝逆转剂加抗癌药物组细胞死亡率抗癌药物组细胞死亡率