肿瘤患者红细胞免疫功能与SAPO-1/Fas、TNF-α、NO表达水平的实验研究(一)

【关键词】 肿瘤

　　【摘要】 目的 探讨肿瘤患者红细胞免疫功能与SAPO-1/Fas、TNF-α、NO表达水平的相关性及相互作用。方法 采用酵母菌-红细胞免疫黏附试验，对45例化疗前和17例化疗后病情缓解者进行了红细胞C3b受体花环试验（RBC-C3bRR）和红细胞免疫复合物花环试验（RBC-ICR）及ELISA法对107例肿瘤患者及22例健康人进行了SAPO-1/Fas的检测，其中部分进行了TNF-α、NO检测。结果 肿瘤患者血清SAPO-1/Fas表达水平明显高于健康对照组（P0.001），且与肿瘤种类无关；17例化疗后病情缓解者SAPO-1/Fas表达水平比化疗前显著降低(P0.05)。45例和17例肿瘤患者血清同时检测SAPO-1/Fas、TNF-α表达水平及SAPO-1/Fas、NO含量并进行单因素直线相关分析，分别为r=0.76，P0.05，r=0.72，P0.05，呈显著正相关。RBC-C3bRR明显降低，45例肿瘤患者化疗前又明显低于17例病情缓解者(P0.01)，RBC-ICR明显高于健康人，45例化疗前肿瘤患者RBC-ICR明显高于17例化疗后病情缓解者(P0.01)。结论 肿瘤患者RBC-ICR和SAPO-1/Fas、TNF-α、NO表达水平明显增高，呈显著正相关，RBC-C3bRR明显降低。为研究红细胞免疫与淋巴细胞免疫的相互关系及肿瘤治疗提供了新的理论基础和实验依据。

　　【关键词】 肿瘤；SAPO-1/Fas；红细胞免疫；1型补体受体

　　细胞凋亡（apoptosis，APO）和红细胞免疫系统是机体清除感染、变异、衰老的细胞，维持自身正常生理平衡的一种调节方式；同时肿瘤细胞及其相关抗原可能直接旁路激活补体，吸引红细胞（RBC） 1 型补体受体（CR1）免疫黏附肿瘤细胞和相关抗原，并将它们运输至肝脾网状内皮系统，由巨噬细胞销毁〔1〕。近年来，研究发现APO-1与其配体（FasL）通常被认为是致死基因，因为他们的相互作用往往导致表达APO-1的细胞发生APO而受到人们的广泛关注。有研究报道〔2〕，人类许多恶性肿瘤表现为APO功能下降。在肿瘤患者免疫活性细胞如致敏T淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK）等通过Fas系统活化介导细胞毒作用，以凋亡方式清除肿瘤细胞。免疫活性细胞通过其表面的FasL结合表达Fas的靶细胞，从而使其凋亡，而APO-1可与FasL结合，阻碍了靶细胞凋亡。同时一氧化氮（NO）含量超量也可引起基因突变和诱发肿瘤。本研究采用酵母菌-红细胞免疫黏附试验进行了红细胞C3b受体花环试验（RBC-C3bRR）和红细胞免疫复合物花环试验（RBC-ICR）〔3〕及ELISA法测定SAPO-1/Fas分子，并对NO含量和肿瘤坏死因子（TNF-α）的相关性进行了分析研究。现将结果报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象 107例肿瘤患者，男80例，女27例，平均年龄55.48岁，患者均为我院1999～2004年经临床和实验检查确诊的住院患者。22例健康对照组血清来自健康体检人群，男18例，女4例，平均年龄22.27岁。

　　1.2 材料

　　1.2.1 标本收集 所有血样均采自晨间空腹血，部分患者于化疗前后分别采血。常温下3000r/min离心10min，血清于-20℃保存（同时取肝素抗凝血1ml用于红细胞免疫黏附试验）。

　　1.2.2 人SAPO-1/Fas检测 以抗人SAPO-1/Fas单抗预包被酶联试剂盒，美国Genxyme公司，购自品美生物工程有限公司，按说明书操作。

　　1.2.3 血清TNF-α检测 以双抗夹心ELISA法，购自邦定公司，按说明书操作（自行包被）。

　　1.2.4 血清NO含量的检测 以硝酸还原酶法测定血清NO3/NO2代表NO浓度。购自南京建成生物工程研究所，采用荷兰生产RS-232型半自动生化分析仪测定。

　　1.2.5 材料来源 冻干补体致敏酵母菌与未致敏酵母菌（由上海长海医院免疫室提供）。

　　1.3 方法

　　1.3.1 准备1 取肝素抗凝血1ml，用生理盐水洗涤3次，每次2000r/min离心3～5min，做细胞计数并配制成1.25×107/ml应用液备用。

　　1.3.2 准备2 取补体致敏及未致敏酵母菌多糖冻干试剂各1支，按要求溶解，分别用生理盐水洗涤离心2次（2000r/min，4min），计数红细胞并配成1×108/ml应用液备用。

　　1.3.3 操作 取2支试管，每管加入红细胞应用液0.05ml。第一管再加入补体致敏酵母菌多糖液0.05ml，第二管再加入未致敏酵母菌多糖液0.05ml，摇均，放37℃水浴30min。取出用手轻轻摇均，每管各加0.1ml生理盐水，混匀后再各加0.25％戊二醛0.025ml，轻轻混匀，取1/3量，水平涂片，吹干，甲醇固定，瑞氏染色，湿片在高倍镜下计数。1个红细胞结上2个或2个以上酵母菌为1个花环。计数200个红细胞计算出百分率。第一管为RBC-C3bRR，第二管为RBC-ICR。

　　2 结果

　　2.1 肿瘤患者与健康对照组血清SAPO-1/Fas表达水平及NO含量比较 见表1。结果显示，肿瘤患者血清SAPO-1/Fas表达水平及NO含量明显高于健康对照组，并且与肿瘤的种类无关。

　　表1 肿瘤患者与健康对照组人血清SAPO-1/Fas表达水平及NO含量比 （略）

　　注：各种肿瘤之间比较P＞0.05；与对照组比较，P均＜0.001

　　2.2 肿瘤患者化疗前后SAPO-1/Fas水平变化 在接受化疗前后分别测SAPO-1/Fas水平的患者中，化疗后病情缓解17例，化疗前的表达水平为(8.15±0.11)ng/ml，化疗后的表达水平为(7.05±0.59)ng/ml，进行配对资料t检验，P＜0.05。提示SAPO-1/Fas水平随病情缓解显著降低。因化疗后部分病情进展者例数少，未予统计。

　　2.3 肿瘤患者与健康对照组TNF-α水平比较 45例肿瘤患者血清TNF-α水平(6.26±1.74)ng/ml，较健康对照组（22例）的(2.04±0.51)ng/ml显著升高（P＜0.05）。肿瘤化疗后患者血清TNF-α水平呈下降趋势，与肿瘤组比较差别无显著性（P＞0.05）。