当归提取物抗皮肤衰老及美白功效体外实验研究(一)

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作者：高瑞英，党志，邹颖楠 傅中

【摘要】 目的验证中药材当归提取物抗皮肤衰老能力和美白功效。方法对当归提取物的自由基清除、亚铁离子络合及酪氨酸酶活性抑制能力进行体外实验。结果各项功效指标与溶剂浓度及提取物浓度有一定的关联，其中当归50%醇提液自由基清除率最高达到80.2%，铁离子络合率最高达到41.4%，酪氨酸酶抑制率最高达到25.1%。结论当归提取物具有较好的抗皮肤老化和美白双重功效，可用作美白和抗衰老化妆品的天然原料。

【关键词】 当归; 抗衰老; 美白; 体外实验

　皮肤衰老是人体机体的自然发展规律。随着对皮肤衰老机理的深入研究，人们不断的研究和总结预防和延缓皮肤衰老的有效途径和方法。中草药因其独特机理和美容效果已被广泛应用于护肤类化妆品中。

　　当归为伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels的干燥根，是临床常用药，素有“十方九归”之称。性味甘、辛、温，归肝、心、脾经。内服有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效[1]。

　　现代药理学研究进一步发现，当归还具有抗炎、清除氧自由基、增强免疫功能等作用[2]。动物实验研究已表明含复方当归提取物水剂型护肤品具有增加小鼠表皮含水量和提高小鼠皮肤细胞SOD活性;人体试验研究显示它具有改善人体皮肤颜色，增加皮肤白皙、透明效果[3]。这些新的功效在护肤化妆品研发当中得到了重视和应用。

　　本研究主要通过体外实验，从自由基捕捉效应、络合亚铁离子能力及酪氨酸酶活性抑制三方面对当归提取物抗皮肤老化与美白能力进行评估，并对体内实验结果进行检验和佐证。

　　1 材料与仪器

　　当归购自广州市清平药材市场，经广东省中药研究所药物研究室鉴定。

　　DPPH (1,1-diphenyl-2-2-picrylhydrazyl radical)、菲咯嗪(5 mmol/L)、酪氨酸酶(用PBS配制成相应浓度单位)均为sigma公司生产。

　　甲醇、FeCl2・4H2O(2 mmol/L)、熊果苷，EDTA，VitE，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠等试剂均为国产分析纯，配制水均为双蒸水。

　　752型紫外分光光度计，旋转蒸发仪，恒温水浴锅，真空减压泵、中药粉碎机、离心机。

　　2 方法

　　2.1 中药的提取

　　2.1.1 水提法当归100 g→破碎→烘干(80℃)→粉碎(40目)→用双蒸水浸提(分3次进行，3次加水量分别是当归重的10，6，4倍;每次浸提温度为100℃，时间30 min)→合并3次浸提液→离心(1 500 r/min，30 min)→滤液→离心(10 000 r/min，15 min)→滤液→旋转蒸发→当归浓缩液→定容。

　　取定容液配制成0.5%，1.0%，2.0%等3种不同浓度。

　　2.1.2 醇提法将浸提液调整为50%乙醇或95%乙醇进行萃取，方法同“2.1.1”项。

　　2.2 抗老化能力的测定

　　2.2.1 DPPH自由基清除能力测定DPPH为含有奇数电子的稳定自由基，本方法的原理是利用其甲醇溶液在517 nm可见光下具有极强的吸光度，但当其与任一自由基结合或被抗氧化剂还原时，其吸光度会下降;吸光度越低，表示样品清除DPPH的能力越强。

　　取0.2 ml萃取物、3.8 ml甲醇溶液与1 ml(DPPH)radical甲醇溶液(2×10-4mol/L)，充分混和均匀，静置30 min后，以分光光度计测517 nm处吸光度，并以公式计算其自由基清除率[4]。

　　自由基清除率(%)=[(Ac-As/Ac)]×100%

　　As：含有待测物的样品在517 nm处的吸光度;

　　Ac：不含待测物的样品在517 nm处的吸光度。

　　2.2.2 络合亚铁离子能力Fe2+通常为较好的促氧化剂，可以促使脂质氧化作用的进行。本方法利用Fe2+与Ferrozine(菲咯嗪)的复合物在562nm处有呈色反应，可测得样品对Fe2+的络合能力。当样品络合Fe2+会造成吸光度降低，吸光度越高表示络合能力越好[5]。

　　络合率(%)=[1-AsAc]×100%

　　As：含有待测物的样品在562 nm处的吸光度;

　　Ac：不含待测物的样品在562 nm处的吸光度。

　　取不同浓度的萃取液加入0.1 ml的FeCl2・4H2O(2mmol/L)30 s后再加入0.2 ml Ferrozine(5mmol/L)，反应10min后，使用分光光度计检测吸光度，空白试验(Blank)以样品溶剂取代样品。

　　2.3 美白有效性试验―当归提取物对酪氨酸酶活性抑制的影响

　　2.3.1 处理组(萃取液)探讨不同萃取物对抑制酪氨酸酶形成Dopaquinone的能力，并以维生素E(VitE)作对照组。取1 ml的中药萃取液，加入0.9 ml pH 6.8的缓冲液及1 ml 0.03%的酪氨酸溶液于试管中混和，并置于37℃的恒温槽中10 min，再加入0.1ml的酪氨酸酶(350units/ml)水溶液，将溶液混和均匀，置于恒温槽中反应25 min后，以紫外分光光度计测定475 nm时的吸光度(B)[6,7]。