胆囊切除术对豚鼠胃肠移行性复合波与胆酸池大小的影响(一)
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作者：张雪梅, 董蕾, 刘丽娜, 畅碧侠，何谦，李谦
【关键词】 胆囊切除术
Effects of cholecystectomy on gastrointestinal myoelectric activity and bile acid pool size in guinea pigs
【Abstract】 AIM: To investigate whether the bile acid pool size after cholecystectomy is correlated to the gastrointestinal migrating myoelectric plex (MMC) in guinea pigs. METHODS: Gallbladder motilities were assessed before cholecystectomy and interdigestive gastrointestinal motilities were continuously monitored using bipolar electrodes in conscious guinea pigs before and 4 weeks after surgery in standard diet group and high cholesterol diet (cholesterol gallstone) group. Total bile acid pool sizes were measured by isotope dilution method. RESULTS: After cholecystectomy, there were parallel falls in duration of phase I, II, III and MMC cycle duration but increase in amplitude in the guinea pigs with normal gallbladder function, and in the guinea pigs with cholesterol stones, but no significant difference was found (P>0.05). The bile acid pool was definitely small in the gallbladder stone (GS) guinea pigs pared with that in normal guinea pigs (P0.05) and became slightly smaller after cholecystectomy. The bile acid in gallbladder bile and fecal bile acid slightly increased in GS guinea pigs after cholecystectomy, similar to those in guinea pigs with normal gallbladder function. CONCLUSION: Cholecystectomy produces a similar but not insignificant change in the bile acid pool size in guinea pigs with normal gallbladder function and in the guinea pigs with cholesterol stones. MMC is associated to the enterohepatic circulation of bile acids. Gastrointestinal dyskinesia is not the result postcholecystectomy syndrome.
【Keywords】 cholecystectomy; enterohepatic circulation of cholic acid; cholic acid pool; migrating motor plex; gallbladder motility
【摘要】 目的： 研究豚鼠胆囊切除术后胃肠移行性复合波(MMC)是否与胆酸池大小有关. 方法： 60只豚鼠分别给予正常饮食8 wk（A组、B组），10 g/L胆固醇饮食8 wk（C组、D组），喂养结束后，评估胆囊动力并将电极植入胃肠道；其中B组、D组同时行胆囊切除术，术后4 wk记录MMC并测量胆酸池大小. 结果： 胆囊切除后，正常与胆结石豚鼠MMC I, II, III期时限与总周期平行缩短而波幅升高，但无显著性差异. 胆结石豚鼠比正常豚鼠胆酸池减小(P0.05)，并且手术后再轻微下降；而胆酸、粪胆酸轻微升高，其程度与正常豚鼠手术后的变化一致. 然而，这些变化没有统计学差异. 结论： 在正常与胆结石豚鼠，胆囊切除术没有引起MMC与胆酸池大小改变，但MMC运动与胆酸池密切相关，因此，胆囊切除术后综合征不是胃肠动力障碍所致.
【关键词】 胆囊切除术；胆酸肠肝循环；胆酸池；移行性复合波；胆囊动力
0引言
胆囊切除后胆酸肝肠循环改变引起胃肠动力异常已引起人们注意. 胆酸肝肠循环调节消化间期胃肠移行性复合波(migrating motor plex, MMC)有重要作用〔1〕. 而胆酸池是指参与肝肠循环的胆酸总量，因此，弄清胆酸池与MMC的关系十分必要. 由于胆囊切除术前无法测量人的胆酸池大小，胆酸池的作用很少研究. 因此，胆囊切除术对胃肠动力的作用以及与胆酸池大小的关系仍不清楚. 我们检测胆囊切除前后正常豚鼠与胆囊结石豚鼠的MMC与胆酸池的变化，为探讨MMC是否与胆囊切除有关以及MMC与胆酸池的关系提供科学依据.
1材料和方法
1.1材料
3H牛磺胆酸（放化纯度>97%，放射比度129.5 GBq/mmol）（Sigma公司）; 闪烁液（PerkinElmer 公司）. 选取健康成年雌性Hartley系豚鼠60只，体质量350～400 g，由西安交通大学医学院动物实验中心提供. 所有动物随机等分为4组，每组15只， A组（对照组）与B组（单纯胆囊切除组）给予正常饮食至少8 wk；C组（胆囊结石组）与D组（胆结石切除组）给予10 g/L高胆固醇(0.3 g/d) 饮食8 wk. 不同饮食喂养的豚鼠体质量增加与最终体质量无显著性差异. 所有的动物自由饮水，每日光照不少于12 h并保持环境安静清洁.
1.2方法
1.2.1胆囊动力通过检测空腹和餐后胆囊容积的变化来评估胆囊排空. 用探头频率7.5 MHz 的ESAOTEAU5彩色多普勒超声仪（意大利百胜公司）探测胆囊容积. 禁食12 h，将实验动物仰卧或侧卧，5 min内用超声仪测量空腹胆囊容积3次，记录胆囊的最大长径（L）,最大横径（W）与最大短径（H）. 测量完后，给予豚鼠流质脂肪餐灌胃〔2〕，30 min后按上述方法测量胆囊残余容积. 根据国际通用Dodds椭圆法计算胆囊空腹容积，胆囊残余容积V=π/6×（L×W×H）. 按下述公式计算胆囊排空率=（空腹容积─残余容积）/ 空腹容积×100%
1.2.2胃肠移行性复合波(migrating motor plex , MMC) 豚鼠禁食12 h后，氯胺酮50 mg/kg，赛拉嗪4 mg/kg，乙酰丙嗪0.5 mg/kg im麻醉，于右肋缘下0.5 cm处，横切口3 cm，行胆囊切除术（B，D组）. 然后分别埋植4对银电极于接近幽门1～2 cm的胃窦，距幽门1～2 cm，25～30 cm, 95～100 cm的十二指肠、空肠、回肠4处的浆肌层(所有组). 最后钳夹4对导线末端从肩胛间切口通过隧道穿出腹部皮切口，缝合背部切口并固定导线. 术后分笼单独清洁饲养1 mo后即可用于实验. 在此阶段，每日收集粪便以测定粪胆酸. 实验前禁食16 h，然后用RM6280C 八导生理记录仪(成都仪器公司)连续记录清醒豚鼠的胃肠肌电活动，每只至少8 h，出现2～3个MMC. MMC的3个不同时相定义如下: 1相为静止期；2相为不规则收缩；3相为规则收缩至少持续2～3 min并沿胃肠道反口移行. 肌电活动的周期为从1个MMC的3相末到下一个MMC的 3相末.
1.2.3胆酸池测定用同位素稀释法测定胆酸池的大小. 豚鼠ip 3HTCA 9.25 GBq,禁食12 h后，动物在氯胺酮麻醉下，剖腹, 穿刺胆囊或胆总管，抽取胆汁并测量空腹胆囊胆汁量，在光学显微镜下观察胆囊胆固醇结石和结晶情况. 再将其配成500 mL/L乙醇胆汁混合液，置4℃冰箱保存. 取一份胆汁用等量的石油醚萃取1次，弃去石油醚，取胆汁乙醇溶液0.5 mL置入闪烁杯，加闪烁液11 mL，充分混匀，在4℃冰箱内过夜. 用GJRT液体闪烁仪测定胆汁的cpm值，通过公式计算得dpm值（dpm=cpm/E）用外部标准法校正猝灭. 剩余的胆汁乙醇溶液用循环酶法测定胆汁中胆汁酸的浓度. 因为同位素在整个胆道中随机分布，总胆酸池大小可用下列公式计算: 总胆汁酸池(mmol) =所给3HTCA放射强度（dpm）×〔胆汁胆汁酸浓度(mmol/L)÷胆汁放射性浓度(dpm/L)〕.
统计学处理: 结果以x±s表示，用SPSS 11.0统计软件作统计学分析. 多组均数比较采用方差分析，方差不齐时采用变量变换后再行方差分析；手术前后采用自身前后配对设计t检验来统计，P0.05认为有统计学意义.