生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响(一)

详细内容

作者：蔡莹，蔡光先，刘柏炎，杨辉，谢勇

【摘要】 目的 观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。方法 选用雄性昆明种小鼠，随机分为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组（含生药２．５ ｇ／ｋｇ）及生晒参超微饮片１／２剂量组（含生药１．２５ ｇ／ｋｇ），采用利血平法制备脾虚动物模型，分别给予生理盐水、生晒参超微滤液及生晒参传统汤剂，造模及给药后处死小鼠，取小肠空肠段作光镜ＨＥ染色观察小鼠小肠黏膜形态改变，电镜观察小肠超微结构变化。结果 用药后生晒参超微饮片全剂量组能明显改善脾虚小鼠小肠上皮微绒毛，改善细胞质和细胞器结构，有显著的修复作用。结论 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜的修复作用优于生晒参传统汤剂。

【关键词】 生晒参；超微饮片；脾虚模型；小肠黏膜；形态学；小鼠

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏ－ｐｉｅｃｅｓ ｏｆ ｄｒｙ Ｒａｄｉｘ ｇｉｎｓｅｎｇ ｏｎ ｍｕｃｏｓａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｎ ｍｉｃｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｍａｌｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ５ ｇｒｏｕｐｓ ａｓ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，ｂｌａｎｋ ｇｒｏｕｐ，ｄｒｙ ｇｉｎｓｅｎｇ ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｎｏｒｍａｌ ｄｏｓａｇｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏ ｐｉｅｃｅｓ ｇｉｎｓｅｎｇ ａｎｄ １／２ ｄｏｓａｇｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｉｅｃｅｓ； Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｓｅｒｐｉｎｕｍ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ｓａｌｉｎｅ，ｔｈｅ ｌｉｑｕｉｄ ｏｆ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏ－ｐｉｅｃｅｓ ａｎｄ ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｙ ｇｉｎｓｅｎｇ； Ａｎｄ ｔｈｅｎ，ａｌｌ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｋｉｌｌｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏ－ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｊｅｊｕｎｕｍ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｗｉｔｈ ｅｌeｃｔｒｏ－ｓｃｏｐｅ． Ｒｅｓｕｌｔ Ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉｏｃｈｏｒｉａｌ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｂｏｔｈ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ｏｒｇａｎｅｌｌｅ ｗｅｒｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｎ ｓｐｌｅｅｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏ－ｐｉｅｃｅｓ ｇｉｎｓｅｎｇ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏ－ｐｉｅｃｅｓ ｏｆ ｄｒｙ ｇｉｎｓｅｎｇ ｉｓ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｄｒｙ ｇｉｎｓｅｎｇ ｐｉｅｃｅｓ ｉｎ ｒｅｐａｉｒｉｎｇ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ ｍｕｃｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｉｎ ｍｉｃｅ．

〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 ｄｒｙ ｒａｄｉｘ ｇｉｎｓｅｎｇ； ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏ ｐｉｅｃｅ； ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ； ｍｕｃｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ； ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ； morphology; ｍｉｃｅ

脾虚证是中医常见证型，可见于消化系统多种疾病，现代研究表明，中医的脾本质是以消化系统为主的多系统功能综合单位，脾虚主要表现在小肠功能的改变〔１〕。小肠既是药物吸收的主要场所，又是脾虚证主要病变部位，且人参具有益气健脾之功效。基于此，本研究旨在观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。

１ 材料与方法

１．１ 材料

１．１．１ 动物 健康雄性昆明种小鼠，清洁级，体质量（２０±２） ｇ，由湖南中医药大学实验动物中心提供，合格证号：医动字号２０－００２。

１．１．２ 药物 购置生晒参药材，由湖南省中药超微工程技术中心检测合格后，按有关工艺分别加工为超微和传统饮片。传统饮片第１次煎加水５００ ｍＬ，煎汁１５０ ｍＬ，第２次煎加水３００ ｍＬ，煎汁１５０ ｍＬ，将两次煎液混匀；超微饮片先６０ ℃开水１ ０００ ｍＬ搅拌，静止１０ ｍｉｎ，纱布过滤取上清液，再加水１ ０００ ｍＬ，如前取上清液，两次煎液混匀。将传统饮片及超微滤液分别浓缩成每毫升含生药１ ｇ，冷藏备用。

１．１．３ 试剂与仪器 利血平注射液，广东邦民有限公司产（批号：０４０６２０，规格：１ ｍL／ｍｇ）；ＢＸ－５１光学显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司），８８００型超薄切片机（ＬＫＢ公司）， Ｈ－６００透射电镜（日立公司）。

１．２ 方法

１．２．１ 动物分组与造模 将小鼠随机分为５组，分别为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组（含生药２．５ ｇ／ｋｇ）及生晒参超微饮片１／２剂量组（含生药１．２５ ｇ／ｋｇ）。除正常组外，余４组采用利血平法制备脾虚动物模型〔２〕，即按皮下注射利血平０．２５ ｍｇ／ｍＬ每天１次，连续注射１４ ｄ。

１．２．２ 给药方法 模型制备成功后，空白对照组灌胃生理盐水２０ ｍＬ／（ｋｇ・ｄ），生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组均灌胃含生药２．５ ｇ／ｋｇ（按成人７０ ｋｇ体质量每次服用１０ ｇ折算２倍量给药），生晒参超微饮片１／２剂量组灌胃含生药１．２５ ｇ／ｋｇ，连续给药１２ ｄ。

１．２．３ 观察方法 造模及给药后分别脱颈处死小鼠，取小肠空肠段，经０．０１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ冲洗后，作光镜、电镜观察。

１．２．４ 光镜标本制备 处死动物后，取空肠１ ｃｍ组织，４％多聚甲醛固定２４ ｈ，常规脱水，沿纵轴方向石蜡包埋，切片ＨＥ染色，光镜观察。

１．２．５ 透射电镜标本制备 样品经２．５％戊二醛固定后，０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ漂洗，１％锇酸后固定，０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ漂洗，丙酮逐级脱水（浓度为５０%、７０%、９０%、１００％）后，Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂与１００％丙酮１∶１比例浸泡，Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂浸泡、包埋，ＬＫＢ公司８８００型超薄切片机切片，醋酸铀、硝酸铝双重染色后，日立Ｈ－６００透射电镜观察。