乙肝小三阳血清HBV?DNA定量检测及其与前S1关系的研究(一)

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〔摘 要〕 目的：检测乙型肝炎小三阳患者HBV?DNA含量，并与前S1抗原(Pre?S1)进行比较分析。方法：收集351例乙型肝炎小三阳患者血清和30例正常体检者血清，用ELISA方法检测前S1抗原，用荧光定量PCR方法定量检测HBV?DNA。结果：HBsAg、抗?HBe、抗?HBc阳性(小三阳)患者HBV?DNA检出率为62.7%(4.5×106 copies／ml)，前S1抗原检出率为72.9%。结论:HBeAg转阴者也存在病毒复制，HBV?DNA与前S1抗原相关性较好，对于乙型肝炎患者在常规血清学标志物检测的基础上对HBV?DNA数量进行动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。

　　〔关键词〕 乙型肝炎；HBV?DNA；前S1抗原

　　Study the Relationship of HBV?DNA Quantitatively Detection and Pre?S1 for the Patients of Hepatitis B with Positive of HBsAg、Anti?Hbe and Anti?HBc

　　　Abstract：Objective To determine hepatitis B virus?DNA(HBV?DNA) and pre S1 antigen in patients with hepatitis B and expolore their different clinical values.Methods 351 positive serum of HBsAg,anti?HBe,anti?HBc of hepatitis B and 30 healthy man wrer collected.Pre?S1 antigen and HBV markets were detected with ELISA and HBV?DNA with fluorescent quantitative PCR(FQ?PCR) respectively.Results The positive rates of HBV?DNA and Pre?S1 antigen were 62.7%(4.5×106 copies／ml)、72.9% respective in patients with hepatitis B of which HBsAg、anti?HBe、anti?HBc were positive.Conclusion There were replication of virus in patients with HBeAg negative,The serum levels of HBV?DNA of patients with hepatitis B closely correlate Pre?S1.HBV?DNA with fluorescent quantitative PCR for the patients with hepatitis B is helpful to clinical diagnosis、clinical eva lution and prognosis.

　　Key words：Hepatitis B；HBV?DNA；Pre?S1 antigen

　　乙型肝炎血清标志物的检测方法有多种，寻求快速、敏感和特异性检测手段具有十分重要的意义。前S1(Pre?S1)抗原已成为HBV感染、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后的一个重要标志，但存在“窗口期”及“免疫逃避株”等问题。乙型肝炎病毒HBV?DNA含量是判断病毒复制活跃和具有传染性的直接可靠依据，HBV?DNA定量测定可以反映乙型肝炎病毒(HBV)的量的变化，直接检测患者血清中病毒的拷贝数量，反映患者病毒血症的水平。本研究观察了乙肝小三阳患者血清标志物、前S1和HBV?DNA三者之间的相关性，探讨了HBV?DNA检测的临床意义,现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本 收集我院351例乙型肝炎小三阳患者血清,其中男273例，平均年龄30.1岁，女78例，平均年龄32.3岁，健康对照30例,男25例，平均年龄33.8岁，女5例，平均年龄34.6岁。留取清晨空腹静脉血，分离血清，-20 ℃保存待检。

　　1.2 仪器 RSP150/8全自动加样器(瑞士TECAN公司生产)，BEPⅢ全自动酶免疫分析仪(德国DadeBehring公司生产)，美国ABI公司AB770型PCR荧光定量仪。

　　1.3 方法

　　1.3.1 血清标志物(HBsAg、抗?HBs、HBeAg、抗?HBe、抗?HBc)检测 应用ELISA方法，试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供，试剂批号分别为：20060718、20061013、20060913、20060925、20060924。用瑞士TECAN公司生产的加样器(RSP150/全自动酶免分析仪)进行加样(包括质控血清、阴阳性对照及待检血清)，然后用BEPⅢ全自动酶免疫分析仪进行检测，判定方法严格按照说明书进行。

　　1.3.2 前S1抗原检测 采用双抗体夹心ELISA法，用抗?前S1和抗?HBs作为固相化抗体和酶标抗体，单抗捕获待检标本中的乙肝病毒表面抗原，用辣根过氧化物酶标记的抗Pre?S1单抗作为检测抗体。严格按照试剂盒说明书的检测步骤进行操作，根据酶?底物反应后的呈色吸光值，测定血清中乙肝病毒Pre?S1，试剂由上海阿尔法生物技术有限公司提供，试剂批号：20060601。

　　1.3.3 HBV?DNA定量测定 采用PCR方法结合荧光探针体外扩增和检测技术，试剂由深圳匹基生物工程股份有限公司，该试剂盒的检测下限为5.0×108 copies／ml，试剂批号：20060301。

　　1.4 统计分析计数资料 采用配对计数资料卡方检验，所有数据用SPSS 11.5处理。