一年蓬挥发油的气相色谱质谱分析及体外抑菌活性研究(一)

详细内容

【摘要】 　　目的对一年蓬中挥发油成分进行气相色谱-质谱联用分析，并进行初步的体外抗菌活性研究。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，用气相色谱-质谱联用方法对其进行成分鉴定，同时用面积归一法测定其含量。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为代表菌种，对一年蓬挥发油进行抗菌活性研究。结果共鉴定出29个化合物，占挥发油总量的85.99%，主要成分有：烯烃类，如β-莰烯、β-广藿香烯、β-蒎烯等；芳香醇、酮、醛、酚类化合物，如a-松油醇、顺茉莉酮、安息香醛、百里酚等。体外抑菌活性表明，一年蓬挥发油对两种试验菌种有明显的抑制作用。结论该实验为进一步开发利用一年蓬资源提供了重要的科学依据。

【关键词】 一年蓬 挥发油 气相色谱-质谱 抑菌作用

　　一年蓬Erigeron annuus (Linn.) Pers.为菊科飞蓬属植物，生长于山坡、路边及田野中，原产美洲，在国内广泛分布。主要功能为消食止泻，清热解毒，截疟。主治消化不良、胃肠炎、疟疾，毒蛇咬伤〔1～2〕。Takeyoshi Iijima〔3〕及李新等〔4〕对一年蓬的化学成分研究表明其主要为萜类及甾类成分，其挥发油类成分尚无报道。本文采用常规的水蒸气蒸馏法提取其挥发油，利用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）对其挥发油成分进行定性定量分析，同时以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为代表菌种，对一年蓬挥发油进行抗菌活性研究。本研究为进一步开发和利用一年蓬提供了科学依据。

　　1 仪器与材料

　　Varian CP-3800/Saturn 2200型气相色谱-质谱联用仪（美国）；金黄色葡萄球菌Staphylocous aureus，大肠杆菌Escherichia coli由南京师范大学微生物研究所提供；培养基为LB培养基；所用试剂都为国产分析纯。一年蓬采于江苏南京地区，由南京师范大学生命科学学院龚祝南教授鉴定为飞蓬属植物一年蓬Erigeron annuus (Linn.) Pers.。

　　2 方法

　　2.1 挥发油的提取 将新鲜一年蓬全草晾干后粉碎，称取100 g粗粉，用水蒸气蒸馏法提取其挥发油，馏出物用石油醚萃取得浅黄色液体，得率为0.3%（V/W），用无水硫酸钠干燥后冰箱中保存。

　　2.2 GC-MS分析 采用GC-MS对该挥发油进行成分分析。色谱条件：VF-5ms 毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），载气为氦气，流速1 ml/min；分流比10∶1，进样量1 μl；程序升温60℃保持2 min，以15℃/min升至260℃，保持10 min；进样口温度260℃。质谱条件：离子源为EI源，电压70 ev，质量数范围为50～1 000。检索谱库：NIST谱图库。

　　2.3 一年蓬挥发油抗菌活性研究

　　2.3.1 平板培养法测定抗菌活性 少许挥发油溶于生理盐水（含5%吐温-80）中，配成一定浓度梯度测试液。阳性对照为青霉素钠（福建汇天生物医药公司）。

　　将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌接种于平皿中的LB培养基上，培养24 h，培养基打孔，孔内加入测试液。分别为挥发油溶液，溶剂对照和阳性对照。培养24 h后，测量孔外抑菌圈的毫米数。

　　2.3.2 比浊法测定最低抑菌浓度（MIC） 在灭菌的培养管中加入5 ml经灭菌的液体LB培养基，用微量移液器吸取挥发油原液，使挥发油浓度倍比稀释为10%，5%，2.5%，1.25%，0.625%，0.312 5%系列浓度。各加入20 μl菌悬液，于37℃，100 r/min振荡6 h后，以未接种的培养液加空白溶剂作对照，测定培养液在600 nm处的消光值。