超声波提取枇杷叶总黄酮及其鉴别(一)

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作者：黄锁义， 李卫彬， 阳文辉， 李容

【关键词】 超声波提取；,,枇杷叶；,,总黄酮；,,鉴别

　　摘要：目的为充分利用枇杷叶植物资源，避免资源的浪费，探讨枇杷叶总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从枇杷叶中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.909 0 mg/ml，回收率为100.9%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取枇杷叶黄酮类物质的有效途径。

　　关键词：超声波提取； 枇杷叶； 总黄酮； 鉴别

　　Abstract：ObjectiveTo investigate the extraction and identification methods of total flavanone from Folium Eriobotryae. MethodsThe flavonoids were extracted from Folium Eriobotryae with ultrasonic wave and ethanol extraction. The spectrophotometry was used toextract and check the flavanone of Folium Eriobotryae. ResultsBy this method the density of the total flavanone of Folium Eriobotryae leaves obtained was C=0.909 0mg/ml and the rate of recovery was 100.9%. ConclusionThis text provides the extraction and punfication methods to get the oute and the purity of the flavanone is high. This method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of folium eriobotryae leaves.

　　Key words：Ultrasonic wave treatment; Folium eriobotryae; Total flavanone; Identification

　　枇杷叶为蔷薇科常绿小乔木植物枇杷Eriobotrya japonica (Thnnb.) Lindl.的叶,味苦，性凉。用于肺热咳嗽，气逆喘急，胃热呕逆，烦热口渴，清肺止咳，降逆止呕。治疗腰椎增生性关节炎、前列腺增生、术后疼痛、痹症、肩周痛、消除乳房硬块及辅治神经疾病等症状〔1，2〕。研究表明〔3，4〕：枇杷叶的主要化学成分为橙花叔醇、金合欢醇以及丰富的黄酮类化合物。尚有α和β蒎烯、莰烯、月桂烯、对聚伞花素、芳樟醇、α衣兰烯、α和β金合欢烯、樟脑、橙花醇、牛儿醇、α毕澄茄醇、榄香醇、顺β,γ己烯醇和芳樟醇氧化物。亦含苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、鞣质、维生素B和维生素C等，还含山梨糖醇。有文献报道枇杷叶中总黄酮的提取方法采用水提法〔3〕，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道〔4，5〕，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响〔5〕，但超声技术应用于提取枇杷叶中黄酮类物质的研究尚未见报道。本文报道用超声波提取枇杷叶总黄酮及鉴别。

　　1 仪器与试剂

　　1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

　　1.2 试剂 95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜枇杷叶采自右江民族医学院校园内。

　　2 方法与结果

　　2.1 总黄酮成分提取 取新鲜枇杷叶，烘干，粉碎。称取枇杷叶粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5~7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

　　2.2 测定方法依据 以芦丁为对照品测定枇杷叶中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

　　2.3 定量实验总黄酮的含量测定

　　2.3.1 波长的选择 取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范围测定螯合物的吸光度，螯合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

　　2.3.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白，于510 nm处测定吸光度。结果见表1。

　　表1 紫外可见分光光度计测定（略）

　　2.3.3 提取物含量的测定 精密吸取样品液0.50 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.635，根据回归方程：A=2.230×10-4+14.46C，计算样品中总黄酮的含量C=0.909 0 mg/ml。