便塞通颗粒水提澄清工艺研究(一)
详细内容
作者：张丹 李毅 唐学贵 钟华 周淑芳
【摘要】 目的优化便塞通颗粒水提澄清工艺。方法采用水提液絮凝澄清法与离心法平行对比，以辛弗林、总黄酮保留率及干膏率为评价指标优选水提液澄清工艺。结果高速离心澄清工艺能有效保留辛弗林及总黄酮等有效成分。选取最佳纯化条件为：药液浓缩至相对密度为1.05（60℃），以12 000 r・min-1高速离心10 min。结论该法简单可取，适合于便塞通颗粒水提澄清工艺。
【关键词】 水提液；澄清；离心法；絮凝澄清法
Abstract：ObjectiveTo optimize the removing impurity method from water of Bian Setong Granules.MethodsThe methods of clarifying water of Bian Setong Granules by clarificant and by centrifuging were pared with the remaining rates of Synephrine, total flavonoids and dried extract as indexes. ResultsCentrifuging could remain effective active ponents. The most optimal clarifying condition was to concentrate the mixture to relative density of 1.05(60℃), and centrifuge in 12 000 r/min-1 for 10 minutes.ConclusionThe process is simple and preferable and can be used to clarify Bian Setong Granules.
Key words：Water-extraction; Clarifying; Centrifuging; Natural clarify medium
便塞通颗粒剂是在古方枳术丸《脾胃论》的基础上加味而来，加味后由白术、枳实、生地黄等药组成，具有补气健脾、调和脾胃、滋阴除热之功，主治老年性便秘、排便不爽等症。原方为汤剂，其有挥发性成分易损失、稳定性差，携带不便等缺点，故通过现代工艺的改革研究，将其制成颗粒剂。中药复方制剂多采用水提醇沉工艺，根据预试验可知乙醇沉淀法虽然能降低出膏率，但对辛弗林和总黄酮也有一定的影响。因此，本文以主药有效成分辛弗林、总黄酮的保留率以及干膏率作为评价指标，对吸附澄清剂法和离心法进行了考察，优选出便塞通颗粒的最佳澄清工艺。
1 仪器与试药
安捷伦1100系列高效液相色谱仪（DAD检测器、自动进样）；电子天平（sartorius 十万分之一）；DGG-9030型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；TDL-5-L离心机（上海安亭科学仪器制造厂）；便塞通水提液（自制，由白术、枳实等药提取）；辛弗林对照品（110727-200306，中国药品生物制品检定所）；芦丁对照品(100080-200306，中国药品生物制品检定所)；ZTC1+l-Ⅱ型天然澄清剂(天津正天成澄清技术有限公司)；甲醇（色谱纯）。其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 辛弗林测定方法
2.1.1 辛弗林对照品溶液的制
备精密称取辛弗林对照品10.94 mg于50 ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，精密吸取1.5 ml溶液于10 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液备用。
2.1.2 便塞通制剂样品溶液制备
吸取便塞通制剂澄清药液，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液备用。
2.1.3 色谱条件色谱柱为C18-ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇∶磷酸二氢钾水溶液（取磷酸二氢钾0.6 g，十二烷基磺酸钠1.0 g，冰乙酸1 ml，加水至1 000 ml）（51∶49）；紫外扫描，辛弗林最大吸收波长λ=275 nm；柱温30℃；流速1.0 ml/min。目标峰保留时间tR=18.357 min，目标峰基线分离，阴性无干扰。
2.1.4 标准曲线的绘制
分别吸取辛弗林对照品溶液4，8，12，16，20，24 μl按照上述色谱条件依次进样，测定峰面积，以峰面积为纵轴，进样量为横轴，得回归曲线Y=404.92X-1.311 3，R2=0.999 7，辛弗林进样量在0.131 28～0.787 68 μg范围内具有良好线性关系。
2.2 总黄酮测定方法〔1〕
2.2.1 对照品溶液的配制
精密称取干燥至恒重的芦丁对照品20.54 mg，置100 ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，配制成每毫升含0.205 4 mg芦丁的标准品溶液。
2.2.2 标准曲线绘制
分别精密吸取芦丁对照品溶液(0.205 4 mg/ml)0 ml(空白)， 1，2，3，4，7 ml至25 ml容量瓶中，分别加入蒸馏水至7 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀，放置6 min，加10%的硝酸铝1ml，混匀，放置6 min，加10%氢氧化钠10 ml，再加水至刻度，摇匀放置15 min，照分光光度法〔1〕，在510 nm处测定吸光度，得回归曲线为Y=12.87X-0.021，R2=0.999 9，总黄酮含量在0.205 4～1.437 8 mg范围内呈良好的线性关系。
2.2.3 便塞通制剂样品溶液制备
分别精密吸取便塞通制剂澄清药液1 ml，置25 ml容量瓶中，分别加入蒸馏水至7 ml，照“2.2.2”项下的方法，自“加5%亚硝酸钠溶液1 ml”起，依法测定吸收度。
2.3 干膏收率测定
精密量取各个纯化后的水提取液10 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称重，计算干膏收率。
2.4 絮凝澄清法
2.4.1 澄清剂溶液的制备
采用ZTC1+1-Ⅱ天然澄清剂，按说明书配制。
A组分溶液：称取0.500 g A组分细粉，先用少量水搅拌成糊状，再加水调至50 ml，溶胀24 h，搅拌，双层纱布滤过，即得1%粘胶液。
B组分溶液：称取0.500 g B组分细粉，用少量1%乙酸溶液溶解并搅拌成糊状，然后加1%乙酸溶液调至50 ml，溶胀24 h，搅拌，双层纱布滤过，即得1%粘胶液。
2.4.2 澄清剂溶液的加入
顺序根据说明书，药液为酸性溶液，应先加入澄清剂的B组分后加A组分，测得本处方药液为酸性，故确定加入方式为先加B组分后加A组分，B∶A=2∶1〔2〕。