砂仁及其混淆品的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究(一)
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作者：王祥培，吴红梅，赵杨，孙宜春，靳凤云，万德光
【摘要】 目的建立砂仁及其混淆品的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱鉴定方法。方法采用RP-HPLC（DAD）法，梯度洗脱，测定阳春砂、海南假砂仁及艳山姜的指纹图谱，并作相似度比较分析。结果砂仁及其混淆品的HPLC指纹图谱有明显差异。结论HPLC指纹图谱具有重现性好，特征性强，方法简便等特点，可用于砂仁与其混淆品药材的鉴别。
【关键词】 砂仁 混淆品 高效液相色谱 指纹图谱
Abstract：ObjectiveTo establish HPLC fingerprint for the identification of Amomum villosum and its adulterants.MethodsChromatographic fingerprint of Amomum villosum，Amomum chinense and Alpinia zerumbet was determined by RP-HPLC(DAD) and the gradient elution mode was applied in chromatographic separation,data were analyzed by Fingerprint Similarity eva lution Software to pare the similarity of samples. ResultsThere was an apparent difference in fingerprint between Amomum villosum and its adulterants. ConclusionHPLC fingerprint method is repeatable and feasible and can be suitable for identifying Amomum villosum and its adulterants.
Key words：Amomum villosum ; Adulterants; HPLC; Fingerprint
砂仁为姜科植物阳春砂Amomum villosum Lour.绿壳砂A. villosum Lour. var. xanthioides T. L. Wu et Sen jen 或海南砂A. longiligulare T. L. Wu 的干燥成熟果实〔1〕。具有化食开胃，温脾止泻，理气安胎之功效。近年来由于砂仁药材市场需求量大，各种混淆品也流入医药市场。李传印等〔2〕对砂仁的药材性状进行了鉴别研究。而采用HPLC指纹图谱鉴别砂仁与其混淆品的研究尚未见报道，本实验采用高效液相色谱法对砂仁与其混淆品指纹图谱鉴定进行了初步探讨，以期为砂仁质量控制和药材鉴别提供一些依据。
1 材料与仪器
1.1 材料
砂仁购于贵州贵阳、四川成都、广东深圳等地，共10份样品，经笔者鉴定为姜科植物阳春砂Amomum villosum Lour. 的干燥成熟果实；海南假砂仁购于四川成都，经笔者鉴定为姜科植物海南假砂仁Amomum chinense Chun ex T.L.Wu的干燥成熟果实；艳山姜购于四川成都经笔者鉴定为姜科植物艳山姜Alpinia chinense Chun ex T.L.Wu的干燥成熟果实。
1.2 仪器与试剂
Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD)；《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》(国家药典委员会)；槲皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111538-200301）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Dikma公司Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5 μｍ）；流动相为乙腈（A）与0.1%磷酸（B）梯度洗脱，梯度条件0→11 min，A（%）0.5～5，B（%）99.5～95，11→61min，A（%）5～20，B（%）95～80，61→75 min，A（%）20～25，B（%）80～75，75→80 min，A（%）25～25，B（%）75～75；流速0.8 ml/min；柱温25℃；检测波长258 nm；参比波长360 nm；分析时间80 min；进样量10 μl。
2.2 供试品的制备精密称取药材细粉2.0 g，加石油醚（60～90℃）50 ml，超声15 min，滤过，残渣挥干溶剂，加甲醇50 ml回流1 h，滤过。残渣加甲醇50 ml，继续回流1h，滤过，合并两次滤液。置蒸发皿水浴挥干溶剂，残渣加甲醇溶解并定容至10 ml。用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品的制备精密称取槲皮苷对照品适量，加甲醇制成24.72 μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
2.4 方法学考察以购于广东深圳的阳春砂药材为样品，对其稳定性、仪器精密度、重复性作了相应考察，结果证明稳定性及重复性良好。
2.4.1 精密度实验取同一份供试品溶液，重复进样6次，直观观察指纹图谱的全貌无明显差别，用相似度软件计算，在同一台仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别为：0.986，0.992，0.991，0.981，0.982，0.972，均大于0.95。表明该仪器的精密度良好。符合指纹图谱检测要求〔3〕。