乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱含量测定(一)

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作者：范成杰，刘友平，陈鸿平，石宇华

【摘要】 　　目的应用高效液相色谱（HPLC）法测定乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量，并以齐墩果酸和熊果酸为指标成分建立乌梅肉的质量标准。方法采用Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；甲醇－0.2%乙酸铵水溶液（83∶17）为流动相；检测波长210 nm，流速0.8 ml/min，柱温25℃。结果齐墩果酸的线性范围为0.168～1.512 μg，r＝0.999 6，回收率为98.00%（RSD=0.53%）；熊果酸的线性范围为0.452～4.068 μg，r=0.999 9，回收率为97.13%（RSD=1.17%）。结论该方法简便、可靠、准确，可用于乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量比较和乌梅肉的质量控制。

【关键词】 高效液相色谱法 乌梅肉 齐墩果酸 熊果酸

　　Abstract：ObjectiveTo determine the ursolic acid and oleanolic acid in the pulp of Fructus Mume by HPLC. MethodsThe ursolic acid and oleanolic acid were separated on C18 column.Methanol-0.2% Ammonium acetate solution (83∶17) was used as mobile phase and the detection wavelength was 254nm.ResultsThe linearity of ursolic acid and oleanolic acid was in the range of 0.168～1.512μg, 0.452～4.068μg, respectively; the average recoveries of ursolic acid and oleanolic acid were 98.00%(RSD=0.53%,n=5) and 97.13%(RSD=1.17%,n=5). ConclusionThe method is simple, quick and reproducible，and it can be used for the quality control of the pulp of Fructus Mume.

　　Key words：HPLC; Pulp of Fructus Mume; Ursolic acid; Oleanolic acid

　　乌梅，别名酸梅、黑梅，由蔷薇科植物梅Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zu.（Armeniaca mume Sieb.）的干燥近成熟果实加工而成。关于乌梅的入药方式，历代本草记载有去核和连核使用两种，现代研究证明乌梅中有效成分有机酸及水浸出物大多集中在果肉中，核含量甚少〔1〕，且核仁含大量脂肪油成分，具滑泄作用，与乌梅的固涩作用相驳；同时也有报道认为乌梅核特征明显，有利于乌梅的鉴定，而且乌梅核还含有约5％的有机酸，且去核繁琐费时费工〔2〕，所以乌梅是否应分部位药用仍存在争议。《中国药典》Ⅰ部（2005年版）中，净乌梅和乌梅肉都有收载〔3〕。因此明确乌梅的入药方式，是建立乌梅规范的质量标准的前提。本课题组前期对乌梅各部位的化学成分进行了初步比较研究，结果表明乌梅各部位的药理作用不同，代表乌梅涩肠止泻作用的主要药用部位为乌梅果肉。本实验以齐墩果酸和熊果酸为对照品，建立了乌梅果肉中齐墩果酸和熊果酸的RP-HPLC含量测定方法，为乌梅肉的质量标准的规范奠定了基础。

　　1 仪器与试剂

　　1.1 仪器

　　岛津LC-10A高效液相色谱仪，岛津工作站（日本岛津公司）；高效液相色谱柱〔Hypersil-ODS C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），大连依利特公司〕；BP211D（十万分之一），BP121S（万分之一）型电子分析天平（德国Sartorius公司）；BUG25-12超声波清洗机（25 kHz,500 W,上海必能信超声波有限公司）。

　　1.2 试剂

　　齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定，批号：709-8501），熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定，批号：110742-200314）。甲醇为色谱纯,水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

　　1.3 样品

　　药材采或购自不同产地，均经鉴定。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件及系统适应性实验

　　色谱柱为Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)； 流动相为甲醇－0.2%乙酸铵水溶液（83∶17）；检测波长为210 nm；流速0.8 ml/min，柱温25℃。在此条件下分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μl注入液相色谱仪。结果，对照品采用峰面积归一化法计算，二者含量>98％。在此色谱条件可将供试品溶液中齐墩果酸、熊果酸与其它成分峰分离，分离度达1.2，理论塔板数应不低于3 000。对照品溶液、供试品溶液的色谱图见图1～2。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　精密称取齐墩果酸对照品10.50 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为齐墩果酸对照品储备液。精密称取熊果酸对照品11.31 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为熊果酸对照品储备液。分别从两种储备液中精密量取1ml溶液，置同一5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升含齐墩果酸84 μg，含熊果酸226 μg）。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　取乌梅果肉粗粉约4 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理（25 kHz,500 W ）50 min，放至室温，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。