妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的抑制作用(一)

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【摘要】 　　目的研究妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的影响。方法酪氨酸酶多巴速率氧化法测定妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的抑制率。结果妇科再造丸各剂量组均能抑制体外酪氨酸酶活性，其中妇科再造丸高剂量组抑制率达到41%。结论妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性有抑制作用，提示妇科再造丸对皮肤色素沉着可能有一定的治疗效果。

【关键词】 妇科再造丸 色素沉着 酪氨酸酶

　　Abstract：ObjectiveTo study the inhibitory effect of Fu-Ke-Zai-Zao Pill on Tyrosinase activity in vitro.MethodsTyrosinase activity in vitro was measured by the rate of oxidation of L-Dopa. ResultsThree dose groups all had inhibitory effect on tyrosinase activity , especially in high dose group(41%). ConclusionFu-Ke-Zai-Zao Pill can inhibit tyrosinase activity, which maybe the mechanism that make it valid in treating skin pigmentation.

　　Key words：Fu-Ke-Zai-Zao Pill; Pigmentation; Tyrosinase

　　皮肤色素沉着是临床常见疾病，发病人群广泛，在影响患者容貌的同时还会造成心理压力。酪氨酸酶是皮肤黑色素合成过程中的限速酶〔1，2〕。如果它的活性受到抑制，就能使黑色素的合成减少。妇科再造丸由四十余味中药材组成。据文献报道，其组方中的当归、熟地、黄芪、白芍、川芎、益母草、茯苓及山药等多味中药均有抑制酪氨酸酶活性的作用〔3，4〕。因此，我们探讨了妇科再造丸对体外酪氨酸酶活性的影响，旨在为其进一步开发利用提供科学的理论依据。

　　1 材料与仪器

　　1.1 试剂

　　妇科再造丸（贵阳德昌祥制药有限公司，批号051126），左旋多巴（L-Dopa，Sigma公司），酪氨酸酶(Sigma公司)，熊果苷（北京贝丽莱日用化工厂，批号 060502）。

　　1.2 仪器

　　721型分光光度计（上海第三分析仪器厂），AB104-N型电子天平（Metter-Toledo Group）。

　　2 方法

　　2.1 药物制备〔5〕取研磨成粉末的妇科再造丸置于烧杯内，加相当于药量5～7倍的蒸馏水浸泡1～2 h，煮沸30 min，过滤。滤渣加3～5倍量蒸馏水继续煮沸20 min，过滤，合并两次滤液，于水浴上浓缩成每毫升相当于原料药1 g的药液。用pH 6.8，1/15mol・L-1 的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制为高（100 mg・ml-1）、中（50 mg・ml-1）、低（25 mg・ml-1）3个剂量组。阳性对照熊果苷，用Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制成15 mg・ml-1。酪氨酸酶用Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制成1 000 u・ml-1。L-Dopa用Na2HPO4-KH2PO4缓冲液配制成0.1%的溶液。

　　2.2 方法〔6，7〕取1 ml不同浓度的妇科再造丸溶液，加入酪氨酸酶100 μl(100 u)，37℃孵育10 min。加入0.1% L-Dopa溶液1 ml，继续在37℃孵育5 min，立即于分光光度计475 nm处测A475。用15 mg・ml-1的熊果苷作为阳性对照组。每一实验均重复6次。实验结果用Excel2003统计软件进行t检验。

　　2.3 检测指标

　　测定溶液的A475，并按下列公式计算酪氨酸酶活性抑制率：

　　抑制率(%)=〔(A-B)-(C-D)〕/（A-B）×100

　　式中A=A475－药+酶 ：加1ml缓冲液与100 μl 酪氨酸酶

　　B=A475－药－酶 ：只加1.1ml 缓冲液，不加酪氨酸酶

　　C=A475+药+酶 ：加1ml不同浓度的妇科再造丸与100μl酪氨酸酶

　　D=A475+药－酶 ：加1ml不同浓度的妇科再造丸与0.1ml缓冲液