瓜馥木化学成分及其抗肿瘤活性研究(一)
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【摘要】 目的研究瓜馥木的化学成分，寻找抗肿瘤的活性成分。方法采用硅胶柱色谱技术进行分离纯化，运用波谱法进行结构解析，并进行体外抗肿瘤活性筛选。结果从瓜馥木根的乙醇提取物中分离得到1个化合物，经理化常数和波谱 (EI²MS，1H²NMR，13C²NMR) 分析，鉴定为马兜铃内酰胺AⅡ，化合物马兜铃内酰胺AⅡ对肺腺癌GLC²82、白血病细胞株HL60的细胞株的IC50分别为：234.35，101.17 μmol・L-1。结论马兜铃内酰胺AⅡ生物碱化合物具有一定的抗肿瘤活性。
【关键词】 瓜馥木 化学成分 分离和提纯 马兜铃内酰胺AⅡ 抗肿瘤活性
瓜馥木Fissistigma oldhamii（Hemsl.）Merr.为番荔枝科（Annonaceae）瓜馥木属(Fissistigma)植物，根入药，性温味辛，具有祛风除湿、镇痛消肿、活血化淤等功效，主要用于跌打损伤、关节炎及坐骨神经痛的治疗〔1〕。为寻找反映瓜馥木中抗炎、镇痛活性特征成分，我们对瓜馥木化学成分进行了系统研究，已报道O-甲基芒籽碱(O-methyl-moschtaoline)、酸花木碱(毛叶含笑碱，oxylopine)、氧代克斑宁(7-oxocrebanine)和胡萝卜苷(daucosterol)等成分的研究〔2〕。本文报道另一个化合物的分离和结构鉴定，并探讨该化合物对肺腺癌GLC-82及HL60白血病细胞株的抗肿瘤活性。
1 仪器与材料
显微熔点测定仪(温度计未校正)；AB-HS型质谱仪； DRX-400型超导核磁共振仪，TMS为内标。3164 型二氧化碳培养箱(美国FORMA 公司)；比色采用Thermo Labsystems Multiskan MK3 全自动酶标仪。
药材采于江西，由江西中医学院赖学文副教授鉴定为瓜馥木Fissistigma oldhamii（Hemsl.）Merr.，标本存于广东医学院药学教研室。
2 方法与结果
2.1 提取与分离瓜馥木根药材经粉碎后用乙醇加热回流提取（3 h×3次），合并滤液，减压浓缩得总浸膏590 g。浸膏用5%HCl捏溶处理后其酸不溶性部分用蒸馏水洗至中性，用水分散均匀，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯进行提取，回收溶剂得石油醚部分33.2 g，氯仿部分63 g，醋酸乙酯部分45.4 g。氯仿部分反复进行硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇为洗脱剂，得马兜铃内酰胺 AⅡ化合物 (15 mg)。
2.2 结构鉴定采用化学和光谱的方法进行结构鉴定。该化合物与生物碱试剂反应呈阳性，推测该化合物为生物碱。EI-MS给出分子离子m/z 265(M+,100)，结合1H-NMR、13C-NMR，推断分子式为C16H11NO3。UV λMeOHmaxnm:230,265,277； IRKBrmax cm-1：3450，3251（羟基，NH），1691，1656(羰基)，1614，1502 (苯环)；EI-MS谱：265(M+,100)，250(M+-CH3,51)，222(M+- CH3-CO,18)，UV，IR，EI-MS的特征显示该化合物属于马兜铃内酰胺类成分〔3〕。1H-NMR显示在δ4.04 (3H,s)为一甲氧基信号；δ7.08～9.26 ppm处有6个芳香质子信号，其中δ9.26（1H,m），7.49（2H,m），7.77（1H,m）显示出未取代的D环有4氢， H-5由于受3个环的去屏蔽作用，出现在最低场的δ9.26ppm处，可知δ7.49（2H,m）为H-6,H-7，δ7.77（1H,m）为H-8；δ7.08（1H,s）及7.68（1H,s）二个孤立芳香质子信号显示A、C环上各有一孤立芳香质子，因此，A环中有两个芳香质子被取代。13C-NMR显示在δ171.8 ppm处为内酰胺羰基信号,在δ 150.7～107.1有14个芳碳信号，DEPT显示有9个季碳、6个叔碳信号，δ57.4处为甲氧基。该化合物的UV，IR，1H-NMR，13C-NMR，EI-MS数据与文献〔3，4〕中的马兜铃内酰胺AⅡ（Aristolactam AⅡ）数据基本一致。因此，该化合物被鉴定为Aristolactam AII，结构式见图1。
图1 瓜馥木中各化合物结构式（略）
2.3 样品体外培养抗肿瘤作用实验
2.3.1 实验分组 实验分为①空白组：每孔仅为1640培养液，在测光密度值（OD值）时用于调“0”；②对照组：每孔为含1640培养液稀释的单细胞悬液；③实验组：又分1.00×103，1.00×102，10.00，1.00，0.10，1.00×10-2μmol・L-1马兜铃内酰胺AⅡ组，即每孔含1640培养液稀释的单细胞悬液和不同浓度马兜铃内酰胺AⅡ。精密称量马兜铃内酰胺AⅡ后用少量DMSO充分溶解，再用1640培养基稀释成不同浓度备用。各组每孔溶液总体积均为200.00 μl。