微波诱变法选育四环类抗生素菌种的探索和应用(一)

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作者：陈红 王春魁 郭娜 王丽 武芳

【摘要】 采用微波诱变法处理四环类抗生素生产菌种――生金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)。当微波功率1200W、脉冲频率2450MHz时，辐照4s诱变效果最明显。01?2?17菌株处理后得4?14#菌株。该菌株特性优良，15m3发酵罐试验，37批平均发酵效价高于对照菌株5.9%。处理另一株四环类抗生素生产菌种44#，选育出27#菌株，摇瓶复试效价高于对照10.5%以上。

【关键词】 四环类抗生素； 微波； 诱变； 发酵； 生金色链霉菌

微波在生物学上主要用于杀菌、刺激植物种子发芽生长〔1〕。随着人们对微波的生物学效应及微生物特点认识的深入，微波在工业微生物诱变育种中也应用得越来越广泛〔2〕，与紫外线、离子注入、抗癌药物、染料等方法处理菌种相比较，微波处理法具有操作简单、费用低、安全性高、对环境污染小等特点。本试验探索了微波对四环类抗生素生产菌种――生金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)的诱变效应。

1 材料与方法

出发菌株为01?2?17和44#(四环类抗生素生产菌株)。

1.2 培养基

四环类抗生素菌种选育常规培养基。

1.3 诱变处理及筛选方法

(1)孢子悬液的制备 向生长好的出发菌株茄瓶斜面中加15ml无菌水，制成孢子悬液，移入一含有20个玻璃珠的三角瓶中，摇床振摇30min，过滤、稀释。

(2)诱变处理

单次处理 取10-1稀释液10ml，放入玻璃试管中在微波炉中处理。微波诱变采用微波炉最大功率1200W，脉冲频率2450MHz，以辐照不同的时间对孢子进行诱变处理。

累积处理 取10-1稀释液10ml，放入玻璃试管中在微波炉中处理，处理不同时间后冰水冷却1min继续处理。处理采用微波炉最大功率1200W，脉冲频率2450MHz，以辐照不同的时间对孢子进行诱变处理。

(3)稀释分离 将处理过的孢子液稀释至10-5，取每个稀释度的0.1、0.3和0.5ml孢子液涂平板，最适温度培养至长好。

(4)摇瓶筛选 挑选单菌落接于斜面培养基上，最适温度培养好后，挖块接母瓶、发酵瓶，摇床振荡培养7d后放瓶测定化学效价。挑选高效价菌株埋砂土管，进行摇瓶复筛、特性考察。