吴茱萸高效液相色谱指纹图谱的研究(一)
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作者：莫善列，李战，欧莹，韦松，思秀玲
【关键词】 吴茱萸；,,高效液相色谱；,,指纹图谱
摘要：目的研究吴茱萸药材高效液相色谱 （HPLC）指纹图谱的测定方法。方法Alltima C18柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）；流动相∶乙腈∶甲醇∶水（2.0%四氢呋喃+0.4%醋酸）=45∶3∶52；检测波长：225 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃。结果HPLC指纹图谱共有8个色谱峰 (RSD≤3%)，符合有关规定。结论所建立的 HPLC指纹图谱为吴茱萸的质量控制提供了更全面的信息,并为吴茱萸及含吴茱萸药材的中成药指纹图谱研究奠定了基础。
关键词：吴茱萸； 高效液相色谱； 指纹图谱
Abstract：ObjectiveTo study the HPLC fingerprint of Fructus Evodiae. MethodsChromatographic conditions included Alltima C18 column and the mobile phase posed of a mixture of acetonitrile carbinol water. Detection wavelength at 225nm. The mobile phase flow rate was 1.0 ml/min. ResultsThe HPLC fingerprint consisted of 8 peaks(RSD≤3%)，and reached to some relevant provision. ConclusionThe method can provide more information for the quality control of Fructus Evodiae, and it may be practically valuable for the quality control of sample for Fructus Evodiae and it's preparation.
Key words：Fructus Evodiae； HPLC； Fingerprint
吴茱萸为芸香科吴茱萸属植物吴茱萸Evodia rutaeca(Fuss.)Benth.，石虎Evodia rutaeca(Fuss.)benth.var.officinab(Dode)Huang及疏毛吴茱萸 Evodiarutaeca(Fuss.) Benth.var.bodinieri(Dode)的干燥近成熟果实。具有温中散寒、疏肝止痛之功效。中医论述吴茱萸的性味辛、苦，热；有小毒。归肝、脾、胃、肾经。常用于厥阴头痛，寒疝腹痛，寒湿脚气，经行腹痛，脘腹胀痛，呕吐吞酸，五更泄泻等症的治疗〔1〕。近年来，国内众多研究工作者尝试采用各种方法致力于中药质量控制方法研究，并提出许多非常有意义的见解和观点。目前，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量最有效的手段，其根据色谱指纹图谱的模糊属性，着眼于宏观的规律性的特征分析,而不是求索细枝末节。谢培山认为中医药理论和实践的非线性特点要求综合评价中药质量，色谱指纹图谱(图像)分析是对中药及其制剂进行综合宏观分析的可行手段之一。目前，多用吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量控制吴茱萸的质量，但这样不能全面反映吴茱萸中其他成分的情况，难以真正控制其质量。鉴于中药具有复杂的化学成分，而其活性成分常常不明确的状况，本文应用 HPLC方法，建立了吴茱萸的 HPLC指纹图谱分析方法。
1 仪器与试药
仪器美国Agilent 1100高效液相色谱仪，二极管阵列检测器；Alltima C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱分析柱；超声仪 B5200S-DT；乙腈、四氢呋喃和甲醇为色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司)；乙醇和醋酸为分析纯（汕头市天华化学厂）；吴茱萸碱和吴茱萸次碱购于中国药品生物制品检定所。实验中所用吴茱萸采自广西博白 (No.1)、广西龙州 (No.2)、贵州清镇 (No.3)、广西武宣 (No.4)、贵州铜仁 (No.5)、广西全州 (No.6)、广西河池 (No.7)、广西百色 (No.8)、广西梧州 (No.9)，经笔者签定均为芸香科吴茱萸属植物吴茱萸 Evodia rutaeca(fuss.)benth.的干燥近成熟果实。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Alltima C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相∶乙腈∶甲醇∶水（2.0%四氢呋喃+0.3%醋酸）=45∶3∶52；检测波长：225 nm；流速：1.0 ml?min-1；柱温：25℃。进样量：供试品溶液与对照品溶液各20 μl；理论塔板数以吴茱萸碱和吴茱萸次碱计都不少于4 000。
2.2 对照品溶液的制备精密称取吴茱萸碱和吴茱萸次碱，加甲醇制成每毫升甲醇含吴茱萸碱2.2 mg，吴茱萸次碱1.2 mg的溶液作为对照品溶液。
2.3 供试品的制备 称取吴茱萸10 g用100 ml乙醇超声提取30 min，过滤，滤液减压回收溶剂至干，甲醇溶解并定容至25 ml,取溶液过0.45 μm微孔滤膜为供试品溶液。
2.4 方法学考察
2.4.1 稳定性实验 取药材样品号为 No.5的药材，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，在0，4，8，12，20 h进样5次检测指纹图谱，1次20 μl。结果见表1。结果表明：供试品溶液常温下在20 h内，各色谱峰的相对保留时间和峰面积没有明显的变化，符合指纹图谱的要求。
表1 吴茱萸的稳定性实验(略)
2.4.2 精密度实验 取 No.4药材的样品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，连续进样5次，检测指纹图谱。结果见表2。结果表明各色谱峰的相对保留时间和峰面积基本一致。
2.4.3 重现性实验 取No.6药材样品5份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并分别测定其色谱图。结果见表3。结果其相对保留时间稳定，峰面积基本一致，说明本方法重现性较好。