玉郎伞多糖的分离纯化和组成性质研究(一)

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作者：林兴 蒋伟哲 焦杨 张士军 李江 黄仁彬

【摘要】 目的从玉郎伞(YLS)中分离出玉郎伞多糖，并对其化学组成进行研究。方法YLS经醇提后的药渣用热水提取，乙醇沉淀，Sevag试剂脱蛋白，采用DEAE纤维素（DEAE?52）柱层析分离纯化，气相色谱和薄层色谱分析其组成。结果分离得到的YLS多糖经Sephadex?75凝胶柱层析，硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法(HPGPC) 证实为单一多糖，紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰，薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成。结论YLS多糖首次从YLS中提取获得，为YLS主要成分之一。

【关键词】 玉郎伞 多糖 分离纯化 组成玉郎伞（YLS）

　　原植物经考证为蝶形花科植物疏叶崖豆Millettia pulchra Kurzvar?laxior (Dunn) Z. Wei的块根。民间常用于高血压病、跌打损伤和风湿病的治疗，也用于治疗智力减退、消化不良、营养不良和病后虚弱等。药理实验表明，YLS多糖能明显延长小鼠游泳时间、耐缺氧时间及耐高温时间，显著提高小鼠血清SOD、GSH?Px活性及减少MDA含量，具有较好的抗衰老作用〔1〕。本实验对YLS多糖作了分离纯化并对其组成性质进行研究。现报道如下。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂玉郎伞饮片，购于南宁医药公司；D?木糖，生化试剂，上海伯奥生物科技有限公司，批号011130；L（＋）－鼠李糖，生化试剂，北京化学试剂公司，批号011204；阿拉伯糖，生化试剂，武汉生命技术有限公司，批号030625；葡萄糖，分析纯，上海伯奥生物科技有限公司，批号030305；D（＋）半乳糖，生化试剂，sigma ，批号 B002211。DEAE?Cellulose?52, whatman 批号010410；Sephadex G?75， pharmacia,　批号：279867；胰蛋白酶，美国sigma，批号030409。用于气相色谱分析的试剂均为色谱纯，其余试剂为分析纯。

1.2 仪器1525 WATERS高效液相色谱仪，美国 WATERS公司；4890D气相色谱仪，美国Agilent公司；TU?1800SpC紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

2 方法

2.1 粗多糖的提取 玉郎伞饮片粉碎后，加70%乙醇回流提取除去脂溶性杂质，药渣加蒸馏水煮3次，3 h/次，合并滤液，离心分离，浓缩至适当体积，加入5倍量95%乙醇，醇析24 h，过滤，依次用95%乙醇、丙酮洗涤多次，沉淀物加蒸馏水溶解，加入适量胰蛋白酶，摇匀，37 ℃水浴保温12 h，采用Sevage法除去蛋白〔2〕，药渣用蒸馏水溶解，透析48 h，除去小分子杂质及色素，透析后浓缩至适当体积，加5倍无水乙醇，醇析8 h，收集沉淀物，真空干燥得YLS粗多糖。

2.2 多糖纯化 YLS粗多糖适量，加蒸馏水溶解，上已处理好的DEAE?52纤维素（OH?，400 mm×26 mm）柱层析，用蒸馏水洗脱，流速1 ml・min-1，分部收集，每管5 ml，用硫酸?苯酚法显色〔3，4〕，收集合并含糖洗脱液，用旋转蒸发仪蒸干洗脱液，得白色YLS多糖。

2.3 多糖的纯度鉴定

紫外光谱：取上述分离纯化后的多糖，配成0.1%水溶液，在TU?1800SpC紫外可见分光光度计对200～400 nm区间扫描。

凝胶柱层析：YLS多糖经Sephadex G?75柱层析，蒸馏水洗脱，流速0.1 ml/min，每管1 ml分部收集，苯酚?硫酸显色，以管号为横坐标，光密度为纵坐标，根据分部收集中出现的峰数和形状断定多糖的纯度。

高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)〔5〕：美国Waters高效液相色谱仪，2410示差折光检测器（附加GPC软件）。色谱柱为日本TOSOH公司TSKgel G3000 pWxl凝胶色谱柱(300 mm×7.8 mm)，流动相为0.7%硫酸钠水溶液，流速0.6 ml・min-1，柱温35 ℃，进样量20 μl。