缺血性卒中急性期患者红细胞调控白细胞介素 - 18 新的实验体系研究(一)

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【摘要】 目的：采用血液免疫反应路线图实验体系探讨缺血性卒中急性期患者红细胞调控白细胞分泌 IL-18 的能力。方法：将缺血性卒中急性期患者组分为 2 组即大、中小梗死组。将癌细胞（S180）悬液 0.2 mL（10×106/mL）或生理盐水 0.2 mL 加至枸橼酸抗凝全血细胞悬液（或白细胞悬液）0.2 mL 和血浆 0.3 mL 中，37 ℃水浴 1 h，酶联免疫法测定反应 液中 IL-18 含量。结果：大梗死组 IL-18 的含量明显高于中小梗死组和对照组（P 0.01）。中小梗死组无抗原激活组（0.32±0.34）高于抗原激活组（-0.41±0.74）和对照组无抗原激活组（-0.20±0.50）红细胞对白细胞分泌 IL-18 的调控率（P 0.05）。结论：动脉粥样硬化阶段就已经存在红细胞免疫功能的下降，梗塞时更为明显。红细胞对白细胞分 泌 IL-18 具有吸附下调作用，疾病严重时处于失调控阶段。

【关键词】 癌；缺血性卒中，急性期；变态反应和免疫学；红细胞；白细胞介素-18

〔Abstract〕 Objective To approach the capacity of erythrocyte regulating IL-18 in patients with acute ischemic stroke (AIS) by a new experimental system of hemaimmune. Methods Patients with AIS were divided into two groups of the large, the midst and small by the volume of infarction and made group parison. 0. 2 mL suspension of cancer cells (S180:10 ×106/mL) or NS were added into 0.2 mL anticoagulant suspension of whole blood cells or leukocytes and 0.3 mL plasma, then incubated for 1 h at 37℃. The content of IL-18 was determined by ELISA. Results The content of IL-18 in the large group was much higher than those of the others. The regulative capacity of erythtocyte to IL-18 with cancer cells was lower than without in the midst and small group, and also was lower than that of the control group with cancer cells. Conclusion When in the period of atherosclerotic, the immunity erythrocyte had been declined. And it declined more when in AIS. It could absorb IL-18, while it was in imbalance when the disease was serious.

〔Key Words〕 Carcinoma; Ischemic stroke; Acute; Allergy and immunology; Erythrocytes; Interleukin-18

IL-18 作为一种新近发现的促炎细胞因子，机体的众多器官、组织和细胞都可检测到 IL-I8 mRNA 的存在，外周血单核细胞经内毒素（LPS）刺激也有表达。在神经系统中，小胶质细胞[1]、星型胶质细胞[2]、神经元和室管膜细胞[3]也可产生。IL-18 能够有力地激活 T 细胞和巨噬细胞，产生一系列细胞因子。研究表明，IL-18 参与动脉粥样硬化和缺血性脑卒中的病理过程。

本实验采用“血液免疫反应路线图”[4]理论构建的自然与分离的实验体系，测定缺血性卒中急性期红细胞调控白细胞分泌 IL-18 的水平，证实癌细胞可以激活白细胞分泌 IL-18，红细胞可以吸附白细胞分泌的 IL-18，同时也证明了缺血性卒中急性期红细胞免疫功能低下，对白细胞分泌 IL-18 调控的能力处于失平衡状态。

1 材料与方法

1.1 研究对象

缺血性卒中急性期患者 11 例新鲜枸橼酸抗凝血标本，其中男 8 例，女 3 例，年龄 40~66 岁，平均（52.0±5.8）岁，诊断均符合 1995 年全国第 4 届脑血管病会议制定的标准，且均在入院后 3 d 内行头颅 CT 或 MRI 检查证实。按 Pullicino 公式计算脑梗死体积，即：脑梗死体积（cm3）= 长×宽×CT 扫描阳性层面数×π/6。按脑梗死灶体积大小将病例分为中小梗死灶组（1.6~8.0 cm3，n = 8）和大梗死灶组（> 8 cm3，n = 3）。伴有自身免疫性疾病、恶性肿瘤、感染或正在服用激素治疗、体温超过 37.5℃及严重心、肝、肾疾病或 3 个月内有脑卒中史者均排除在外。对照组为存在卒中危险因素但未发生卒中的亚健康者：其中男 5 例，女 2 例，年龄 40~64 岁，平均（51.0±6.0）岁。所有入选病例均行颈动脉超声检查，3 组患者在动脉硬化程度以及年龄上相匹配，无显著统计学差异（P > 0.05）。

1.2 材料

IL-18 酶联免疫试剂盒（法国 Diaclone 公司，批号：H0182710），癌细胞冰冻试剂（S180 株，浓度为 5×106/mL，长海医院输血科血液免疫研究室制备）。

1.3 方法

1.3.1 癌细胞 S180 激活全血细胞和白细胞分泌IL-18 测定法 癌细胞 S180 用生理盐水配成 10×106/mL。抗凝血水平离心分离血浆，放另一试管备用。沉淀血细胞用生理盐水沉淀洗涤 1 次并恢复原体积为全血细胞悬液混匀备用。正式试验；第 1 试管（试管 1）加 0.2 mL 全血细胞，加 0.2 mL 癌细胞悬液，再加 0.3 mL 血浆，为癌细胞激活全血实验组（NEG）。第 2 试管（试管 2）加 0.2 mL 全血细胞，加 0.2 mL 生理盐水，再加 0.3 mL 血浆，为全血细胞生理盐水组（NCG）。

再取两支试管（10 mL 规格试管）分别加入 0.2 mL 全血细胞悬液，用 1~2 mL 蒸馏水在冰水中轻轻吹打 1 min 破坏红细胞后再加等量的高渗盐水恢复等渗，再加生理盐水至满，轻轻吹打洗涤，离心后倒尽上清液，第 1 试管（试管 3）加 0.2 mL 全血细胞和 0.3 mL 血浆，为癌细胞激活白细胞组（IEG）。第 2 试管（试管 4）加 0.2 mL 生理盐水，再加 0.3 mL 血浆，为白细胞生理盐水组（ICG）。试管1、2、3 和 4 分别混匀后 37℃水浴 1 h 后，离心，取上清液，置于 - 200℃冰箱冻存。用酶联免疫法测定反应液中 IL-18 含量，按公式算出各自标本红细胞 IL-18 调控率（%）=〔IEG 中 IL-18 含量（或 ICG 中 IL-18 含量）- NEG 中 IL-18 含量（或 NCG 中IL-18 含量）〕/ IEG 中 IL-18 含量（或 ICG 中 IL-18 含量）。红细胞对 IL-18 的激活指数（%）=〔IEG 中 IL-18 含量（或 NEG 中 IL-18 含量）- ICG 中 IL-18 含量（或 NCG 中 IL-18 含量）〕/ IEG 中 IL-18 含量（或 NCG 中 IL-18 含量）。

1.4 统计学处理

数据结果以 x±s 表示，组间比较采用 t 检验。

2 结 果

2.1 病例组中大梗死组各项指标结果与中小梗死组及对照组 IL-18 各项指标结果

见图 1。大梗死组中各组指标均明显高于相应中小梗死组及对照组的 IL-18 含量（P 0.001）。且中小梗死组也均高于对照组相应各组数据，但无统计意义。

2.2 癌细胞 S180 激活红细胞增强白细胞分泌 IL-18 测定结果自然与分离体系比较

见图 1。在全血细胞免疫反应中，病例组和对照组均是 NEG 明显高于 NCG。在白细胞免疫反应中，除中小梗死组 IEG（此组标准差比较大，考虑可能系样本量比较小的缘故）低于 ICG 外，其余也均是 IEG 高于 ICG。