三黄组合物对2型糖尿病大鼠模型糖脂代谢的影响(一)

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作者：徐楠楠 朱宝长 王卓 吴强三 金瑾 胡文祥

【摘要】 目的探讨由黄连、黄芪和地黄水提物组成的组合物(简称三黄组合物，SH)对2型糖尿病(DM)大鼠糖脂代谢的影响并初探其机制。方法以高糖高脂饲料喂养SD大鼠两个月后小剂量腹腔注射链脲佐菌素（STZ）(25 mg・kg-1)，连续注射3 d，建立糖尿病大鼠模型，随机分为模型组(MC)，盐酸二甲双胍组(Met)，三黄组合物低剂量组(SHL)、中剂量组(SHM)、高剂量组(SHH)，外加常规饲料喂养的正常组。给药后第3，10周测空腹血糖水平(FPG)，第7周测糖异生水平。于实验结束时腹主动脉取血，测血清胰岛素(Insulin)，总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，谷丙转氨酶(ALT)，尿酸(Uric acid)，游离脂肪酸(FFA)含量，取肝脏测肝糖原含量。结果与模型组相比，SH各剂量组都能显著降低糖尿病大鼠的血糖水平，以中剂量组效果最明显，与二甲双胍组相近；三黄组合物可以降低DM大鼠TC，TG，LDL-C含量，升高HDL-C水平，促进胰岛素分泌和肝糖原的合成，抑制糖异生，调节血清FFA，ALT的含量。结论三黄组合物可以有效降低糖尿病大鼠的血糖水平，调节血脂异常，其机理可能包括保护和修复胰岛，促进胰岛素分泌，抑制糖异生，促进肝糖原合成等，此外，三黄组合物对大鼠肝脏也有一定的保护作用，对抑制尿酸沉积，提高尿酸清除率，从而改善胰岛素抵抗，保护肾脏，防治DM并发症具有积极作用。

【关键词】 糖尿病 高血脂 黄连 黄芪 地黄 组合物

随着对天然中草药研究的不断深入，越来越多的中草药已被发现并证实具有降血糖作用。我们在深入考察大量古方并结合现代药学科研文献的基础上，优化组合了以黄连、黄芪和地黄3味中药组成的降糖药物组合物（简称三黄组合物，SH)，通过发挥各味药在降低血糖及改善并发症方面的协同作用，以期达到更佳的降血糖疗效。本实验即对本组合物进行了主要的药效学研究，并在此基础上进行了初步的机理探讨。

1 材料与仪器

1.1 动物SD大鼠，雄性，180～220 g，洁净级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证: SCXK(京) 2006-0008。实验室温度20～25℃，湿度50%～60%，12 h交替光照，动物购进后自由饮食饮水。

1.2 器材强生One Touch Ultra血糖仪，强生(中国)医疗器材有限公司；高速冷冻离心机，美国Thermo公司产品；MD-200半自动生化分析仪，华士信医疗集团公司产品；TU-1810紫外可见分析仪，北京普析通用仪器有限责任公司产品。

1.3 药品与试剂黄连、黄芪、地黄的药用饮片，购自北京京卫大药房, 经同仁堂范国强教授鉴定分别为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch的干燥根茎，豆科植物蒙古黄芪Astragalus membrana -ceus (Fisch.) Bge.ver.mongholicus (Bge.) Hsiao的干燥根，玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch的干燥根茎，用时以黄连、黄芪、地黄按生药量1∶4∶2的比例提取得水煎剂，混合浓缩至相应浓度，4℃保存备用；盐酸二甲双胍，贵州天安药业股份有限公司产品；链脲佐菌素(STZ)，美国Sigma公司生产；柠檬酸、柠檬酸三钠，北京化工厂，A.R产品；强生稳豪血糖试纸，LifeScan公司产品；总胆固醇试剂盒，甘油三酯试剂盒，高、低密度脂蛋白试剂盒，葡萄糖测定试剂盒，均购自中生北控生物科技有限公司产品；游离脂肪酸，尿酸，转氨酶，胰岛素测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所产品。

2 方法

2.1 糖尿病大鼠模型的建立参照文献〔1，2〕设计，略有改进。取SD雄性大鼠70只，按体重随机分为6组，一组为正常对照组(NC)，常规饲料喂养，其余五组喂高糖高脂饲料，诱导胰岛素抵抗(高糖高脂饲料配方：10%猪油、20%蔗糖、1%胆酸钠、2.5%胆固醇、66.5%常规饲料，北京科澳协力饲料有限公司制作)。8周后，将高糖高脂饲料喂养的大鼠禁食12 h，ip新鲜配制的STZ溶液(25 mg・kg-1)，连续注射3 d，空白对照组ip柠檬酸－柠檬酸三钠缓冲溶液，72 h后，将大鼠禁食3 h，剪尾测空腹血糖值，取连续3 d测得的血糖值大于11.1 mmol・L-1者为造模成功者。

2.2 分组与给药将造模成功大鼠共57只，按血糖值随机分为5组，其中，模型对照组(MC)10只，阳性药盐酸二甲双胍对照组（Met 0.3 g・kg-1）11只，三黄组合物低剂量组（黄连0.5 g・kg-1，地黄1 g・kg-1，黄芪2 g・kg-1，SHL)、中剂量组(黄连 1 g・kg-1，地黄 2 g・kg-1，黄芪 4 g・kg-1,SHM)、高剂量组(黄连2 g・kg-1，地黄4 g・kg-1，黄芪8 g・kg-1,SHH)各12只，灌胃给药。其中，正常组与模型组给予相应剂量的自来水。除NC外，其他组继续高糖高脂饲料喂养。

2.3 空腹血糖(FPG)与血脂水平的测定灌胃治疗第3、10周大鼠禁食3 h，剪尾取血测定大鼠FPG。于实验结束前1天，大鼠禁食14 h，ip戊巴比妥钠麻醉大鼠，经腹主动脉取血，半自动生化分析仪测定大鼠血清TC，TG，HDL-C，LDL-C水平。

2.4 血清胰岛素(insulin)，血清转氨酶量(ALT)，游离脂肪酸(FFA)，尿酸(uric acid)的测定 按照试剂盒说明书测定，所用仪器为半自动生化分析仪。

2.5 肝糖原提取和含量测定实验末期处死大鼠，取肝脏，将表面血液冲洗干净，称取0.1 g左右，用PBS组织匀浆(1 g∶50ml)，加4％的磺基水杨酸0.5 ml于0.5 ml匀浆中，混匀，离心，取上清液沸水浴15 min，冷却，冰浴下加蒽酮试剂，TU-1810紫外可见分光光度计测620 nmOD值。

2.6 糖异生实验大鼠灌胃治疗7周后，禁食12 h，ip L-丙氨酸（2 g・kg-1），采集0，60 min时血测血糖水平。

2.7 数据处理实验数据以±s表示，采用双样本等方差分析的t检验进行统计分析。