预防SARS中药方对小鼠细胞免疫功能的影响(一)

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作者：李小波，李娟，马廉兰，张文平，曾祥凤，刘志春

【摘要】 　　目的探讨预防“非典”中药方对机体细胞免疫功能的影响。方法健康雄性、昆明品系小鼠30只，随机等分为3组：①A组(鲜芦根20 g，蝉衣10 g，僵蚕10 g，薄荷6 g，银花15 g，连翘15 g，生甘草5 g)；②B组 (升麻10 g，鱼腥草12 g，鹅不食草12 g，朱砂根9 g，鸭跖草12 g，桃仁6 g，紫金牛12 g，生黄芪10 g，冬虫草6 g，酸浆10 g，金银花15 g，板蓝根12 g，淡豆豉6 g)；③C组(溶剂对照组)。用方药100%水煎剂，每只小鼠体内给药(灌胃)0.5ml/次，2次 /d，12 d，摘眼球取血，流式细胞仪计数A，B，C 3组小鼠的T细胞亚群(CD4+CD8-，CD8+CD4-，CD4+CD8+，CD4-CD8-)；另取小鼠脾细胞作体外细胞培养，以ConA作为剌激物，用MTT法检测淋巴细胞的转化。结果A组CD4+/CD8+ 低于B、C两组(P0.05)，B、C两组间无差异(P>0.05)；A组淋巴细胞转化值较B、C组低(P0.05)，B、C两组间无差异(P>0.05)。结论A方能抑制淋巴细胞转化，降低CD4+/CD8+，从而抑制细胞免疫功能。

【关键词】 SARS； 中药方； 细胞免疫功能

　　Abstract：ObjectiveTo observe the effect of SARS-prevent prescription on cellular immune function in mice.Methods30 healthy female Kunming mice were randomly divided into 3 groups:①Group A was treated with traditional prescriptions A(20 g Phragmitis,rhizoma, 10 g Periostracum cicadae, 10 g Bombyx batryticatus, 6 g Mentha haplocalyx,15 g Flos lonicerae, 15 g Forsythia suspense, 5 g Glycyrrhiza uralensis)100% apozem.②Group B was treated with traditional prescriptions B(10 g black cohosh root, 12 g heartleaf houttuynia herb, 12 g centipedae,herba, 9 g coral ardisia root, 12 g melina munis, 6 g peach seed, 12 g Japanese ardisia stem and leaf, 10 g astragali,radix, 6 g Cordyceps, 10 g Calyx physalis, 15 g Flos lonicerae, 12 g isatidis,radix, fermented soybean)100% apozem.③Group C was treated with sterile water as solvent control group. Each mouse took intragastrically 0.5 ml apozem or water respectively , Bid×12 days. The blood samples were taken by picking eyeball and subgroup of T cells was counted by flow cytometry(CD4+CD8-,CD8+CD4-,CD4+CD8+,CD4-CD8-). Spleen cells were taken out for cultivation in vitro, stimulated by conA, and the transformation of T lymphocyte was detected by MTT.Results①The ratio of CD4+ and CD8+ of group A was lower than that of B and C groups significantly(P0.05), there was no significance between group B and group C(P>0.05). ②The transformation of T lymphocytes of Group A was lower than B and C groups significantly(P0.05), there was no significance between group B and group C(P>0.05).ConclusionA prescription can suppress the transformation of T lymphocytes and lower the ratio of CD4+ and CD8+, so it can suppress cellular immunity function in mice.

　　Key words：SARS; Traditional prescription; Cellular immune function

　　本研究以国家中医药管理局公布的一般健康人群预防SARS的中药方，应用动物体内实验法，观察药物对T细胞数量及亚群、淋巴细胞转化的影响，探讨药方的作用机制，为临床用药提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　健康、雌性、昆明品系小白鼠30只，6～8周，体重16～25 g。赣南医学院实验动物中心提供。实验分别在赣南医学院和暨南大学组织移植与免疫研究中心实验室完成。DG-3022型酶联免疫检测仪，国营华东电子管厂产品；XSZ-D型倒置显微镜，重庆光学仪器厂生产；75-2A型微量振荡器，上海医用分析仪器厂生产；96孔细胞培养板和6孔细胞培养板，德国Nunclon公司生产。采用BD公司FACSCalibur Flow Cytometry system，试剂采用BD公司triTest Three-color reagent，检测分析软件为Multiset自动软件。严格参照仪器及试剂操作规程执行。RPM1640培养基，Gibco公司产品，按其说明用三蒸水配制后过滤除菌，分装后4℃保存，临用前加小牛血清(杭州四季青生物制品厂)达10%和常规量的双抗。伴刀豆素球蛋白(ConA )，用无血清RPM1640培养液配成0.25g/L。四甲基偶氮哇蓝(MTT)，Amresco公司产品，用pH 7.4的PBS液配成5 g/L的溶液，0. 22 μm的微孔滤膜过滤，避光保存。淋巴细胞分离液，上海恒信化学试剂有限公司产品，批号20030617。裂解液、二甲基亚矾(DMSO )，分析纯，苏州正兴化工研究院产品。

　　1.2 方法

　　1.2.1 动物分组及处理30只小鼠随机等分为3组，分别为A组、B组、C组。①A组(鲜芦根20 g，蝉衣10 g，僵蚕10 g，薄荷6 g，银花15 g，连翘15 g，生甘草5 g)；②B组 (升麻10 g，鱼腥草12 g，鹅不食草12 g，朱砂根9 g，鸭跖草12 g，桃仁6 g，紫金牛12 g，生黄芪10 g，冬虫草6 g，酸浆10 g，金银花15 g，板蓝根12 g，淡豆豉6 g)；③C组(溶剂对照组)。各组小鼠禁食水 17 h，每天上、下午各给药1次，0.5 ml/次。各组动物经各实验因素处理后，断髓处死，取脾，去筋膜，然后用MTT法检测T淋巴细胞转化OD值。