头孢吡肟对质粒介导产AmpC β?内酰胺酶大肠埃希菌的接种效应研究(一)

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【摘要】 目的 本实验研究了临床分离的质粒介导AmpC β?内酰胺酶大肠埃希菌，在两种接种浓度下(标准浓度105CFU/ml和高浓度107CFU/ml)测定头孢吡肟、头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦和亚胺培南的MIC值。方法 19株血培养的质粒介导的AmpC β?内酰胺酶大肠埃希菌，其中10株单产ACT型，5株单产DHA型，4株产ACT+DHA型。采用琼脂稀释法测定头孢吡肟等5种抗生素在两种接种浓度下的MIC值。高接种浓度下测得的MIC值较标准接种浓度下的MIC值≥8倍时定义为有接种效应。结果 在标准接种浓度下，亚胺培南的敏感率为100%，头孢吡肟也有84.2%的高敏感率，头孢哌酮/舒巴坦的敏感率为5.3%，头孢噻肟和头孢他啶的敏感率为0。在两种接种浓度下，头孢吡肟MIC值增加从32倍到100多倍不等，100%有接种效应，而亚胺培南几乎没有接种效应。结论 头孢吡肟有明显的接种效应，尽管本文结果为实验室的体外实验结果，但仍建议：头孢吡肟不推荐为临床上治疗由质粒介导AmpC β?内酰胺酶大肠埃希菌引起的严重感染的药物。

【关键词】 质粒介导的AmpC β?内酰胺酶； 接种效应； 头孢吡肟

ABSTRACT Objectives To investigate the activity of cefepime, cefotaxime, ceftazidime, cefoperzone/sulbactam and imipenem in standard (105 CFU/ml) and high (107 CFU/ml) inoculum MIC tests against clinical isolates. Methods A total of 19 Escherichia coli blood isolates producing plasmid?mediated AmpC?type β?lactamase were selected including 10 isolates of ACT, 5 isolates of DHA and 4 isolates of ACT and DHA. Antimicrobial susceptibilities were determined using broth microdilution MIC tests with standard and 100?fold higher inocula. The inoculum effect was defined as an eight?fold or greater MIC increase on testing with the higher inoculum pared with the stardard. Results Under the standard inoculum, antimicrobial susceptibility rates of imipenem, cefepime and sulperazon were 100%, 84% and 5.3% respectively, both cefotaxime and ceftazidime were 0. In tests with AmpC β?lactamase?producing E.coli isolates, the inoculum effect was most consistently detected with cefepime, cefotaxime, ceftazidime, sulperazon. However, the inoculum effect was least frequently detected with imipenem. Conclusion Although the inoculum effect is an in vitro laboratory phenomenon, these results suggest that cefepime may be an unreliable agent for therapy in cases of high inoculum infections caused by AmpC β?lactamase?producing Escherichia coli.

KEY WORDS Plasmid?mediated AmpC?type β?lactamase; Inoculum effect,; Cefepime

革兰阴性菌大多都具有容纳外源性遗传物质的特性，作为医院感染的重要致病菌，继超广谱β?内酰胺酶(ESBLs)后，又出现质粒介导的AmpC酶〔1〕，且质粒介导者因其具有较快的传播速度和较强的耐药性，日益受到人们的重视。据文献报道〔2，3〕，第四代头孢菌素头孢吡肟可以作为治疗质粒介导产AmpC酶细菌的有效药物，仅次于碳青霉烯类药物。在表型筛选中，第四代头孢菌素是否敏感或有无扩大的抑菌圈常作为区分产AmpC酶和ESBLs的判定方法。但是对于确定的质粒介导的AmpC β?内酰胺酶的革兰阴性菌，即使头孢吡肟体外敏感，临床上的治疗也常常不尽人意〔4〕。本实验研究了19株临床分离的血培养质粒介导的AmpC β?内酰胺酶的大肠埃希菌，在不同的接种浓度下头孢吡肟及其它几种头孢类药物的接种效应。

1 实验材料

1.1 实验用菌株

2004年9月～2006年8月，太原地区两家教学医院临床血培养分离的无重复大肠埃希菌216株，经过头孢西丁三维试验、质粒接合传递实验及质粒AmpC酶的基因克隆，获得单产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌19株。质控菌株大肠埃希菌AT25922和肺炎克雷伯菌AT700603作为对照。

1.2 培养基和抗生素纸片

MH(Mueller?Hinton)琼脂、胰酶消化大豆肉汤及抗生素纸片均为英国Oxoid公司产品。

2 实验方法

2.1 产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的筛选及基因型分型

216株血培养阳性的大肠埃希菌，经表型筛选实验、头孢西丁三维试验、质粒接合传递实验及质粒AmpC酶的基因克隆。

2.2 药物敏感实验

采用纸片扩散法(Kirby?Bauer)进行药物敏感性试验。

2.3 最低抑菌浓度(MIC)的测定

按CLSI推荐的肉汤二倍稀释法测定在标准接种浓度105CFU/ml及100倍高浓度107CFU/ml的MIC值。

根据CLSI/NLS 2004年标准，接种浓度为105CFU/ml，实验用5种抗菌药物对大肠埃希菌标准菌株的MIC值的判定标准见表1。当高的接种浓度下MIC≥8倍的标准浓度下的MIC定义为具有接种效果〔5〕。