喘平复方制剂麻黄药材质量筛选分析(一)

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作者：霍务贞，吴燕红，袁旭江，李苑新，朱盛山

【摘要】 　　目的通过对多个产地不同批次麻黄药材质量进行分析比较，确定符合课题需要的麻黄药材，保证制剂疗效稳定和质量可控，并为该新药质量控制提供检测方法。方法 采用薄层法对药材进行初步筛选，用液相法对互为差向异构体的两成分麻黄碱、伪麻黄碱进行含量测定。结果不同产地不同批次麻黄药材中麻黄碱及伪麻黄碱含量差异较大，麻黄碱与伪麻黄碱含量不是成正比关系。结论根据中医辨证论治理论使用麻黄药材的方剂，应根据不同需求选用不同产地的麻黄。该实验经过系统的方法学考察，所建立的含量测定方法具有操作简便、稳定、专属、可重复的特点，可用于麻黄药材及含麻黄复方制剂的质量控制。

【关键词】 麻黄 麻黄碱 伪麻黄碱 质量控制

　　喘平复方制剂是广东药学院中药开发研究所自主研发的新药，主治支气管哮喘、喘息性支气管炎。方中主药麻黄，具有发散风寒、宣降肺气及平喘止咳作用。据现代药理研究，麻黄主要有效成分为麻黄碱，具有兴奋呼吸中枢及舒张支气管平滑肌、解除支气管痉挛的作用〔1〕。在研究中发现，麻黄药材按照《中国药典》2005年版Ⅰ部麻黄含量测定项下检测合格后使用，但是不同产地麻黄对药效影响较大。大量文献报道表明麻黄草中含有两种主要生物碱――麻黄碱和伪麻黄碱，它们化学结构互为差向异构体，但药理作用有所不同，作用强度也有差异〔2〕。为了保证喘平复方制剂疗效稳定，质量可控，本课题组用薄层色谱法和高效液相色谱法对不同产地麻黄药材的质量进行了系统的研究，筛选符合喘平复方制剂功效要求的麻黄药材。

　　1 仪器与试药

　　麻黄药材从广州市药材公司、清平市场、药店等采购，经广东药学院李书渊教授鉴定为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf. 的草质茎。盐酸麻黄碱对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：171241?200404），盐酸伪麻黄碱购自国家麻醉品实验室（批号：1237?200103）。甲醇为色谱纯试剂，水为三蒸水，其它试剂均为分析纯。薄层色谱用硅胶G（浙江台州路桥四甲生化塑料厂），高效液相色谱仪（美国Agilent 1100 型组合式全自动取样），色谱柱phenomenex C8柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），电子分析天平(Sartorius BP211D)。

　　2 方法与结果

　　2.1 对照品溶液制备取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品，精密称定，分别加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品1，2溶液。

　　2.2 供试品溶液制备取麻黄药材，粉碎，过40目，取粉末1 g，加浓氨水数滴，再加三氯甲烷10 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。

　　2.3 薄层层析取对照品溶液和供试品溶液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板(10 cm ×10 cm)上，以醋酸乙酯?甲醇?正丁醇?浓氨试液（10∶1∶0.5∶0.5）为展开剂，展开至约9 cm 时，取出，晾干，喷茚三酮试液，在105 ℃加热至斑点清晰。于可见光下检视。色谱图见图1。

　　《中国药典》2005版Ⅰ部麻黄项下的展开系统是：三氯甲烷?甲醇?浓氨试液（20∶5∶0.5）。结果见图2。该展开条件麻黄碱和伪麻黄碱的Rf值非常接近，温度和湿度对其影响较大，有些条件下麻黄碱和伪麻黄碱Rf值有重叠，不利于分析。本课题经过反复摸索，得到以醋酸乙酯?甲醇?丙酮?浓氨试液（10∶1∶0.5∶0.5）展开条件下展开，两成分完全分开，且不易受温度影响。结果见图1。

　　2.4 含量测定

　　2.4.1 色谱条件

　　色谱柱：phenomenex C8柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：甲醇? 0.01 mol・l-1磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH2.5）（5∶95），检测波长：210 nm，流速：1.0 ml・min-1。在上述色谱条件下，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱可达基线分离，分离度大于1.5，且无其它峰干扰。结果见图3。

　　2.4.2 混合对照品溶液的制备

　　精密称取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品0.025 g、0.025 g，置100 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过（0.22 μm），即得每毫升分别含0.25 mg，0.25 mg的对照品混合储备液。

　　2.4.3 供试品溶液的制备

　　取麻黄细粉约0.2 g，精密称定，用13，10倍量0.05%盐酸水溶液提取两次，第1次1.5 h，第2次1 h，合并煎液，滤过，滤液取1 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置30 min后过滤，取续滤液，即得。

　　2.4.4 线性范围的考察

　　精密吸取上述混合对照品储备液0.5，1，2，3，4，5 μl进样，测定其峰面积积分值，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，盐酸麻黄碱回归方程为：A＝2 203.900 87C+39.962 83，r＝0.999 97；盐酸伪麻黄碱回归方程为：A＝2 019.135 67C+35.564 85，r＝0.999 97。结果表明盐酸麻黄碱在0.125 5～1.255 μg范围内、盐酸伪麻黄碱在0.125～1.25 μg范围内具有良好的线性关系。