知柏地黄片质量标准研究(一)
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【摘要】 目的 建立知柏地黄片的质量标准。方法 对知柏地黄片中的山药、牡丹皮进行显微鉴别；采用HPLC测定山茱萸中马钱苷的含量及牡丹皮中丹皮酚的含量。结果 显微鉴别能快速检出山药、牡丹皮；马钱苷、丹皮酚的质量浓度在4.62～92.32、5.12～102.50 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为99.69%、97.78%，RSD分别为1.70%、1.80%。结论 建立的方法能准确、快速地进行定性、定量检测，可用于知柏地黄片的质量控制。
【关键词】 知柏地黄片；显微鉴别；高效液相色谱法；马钱苷；丹皮酚
Abstract:Objective To establish the quality standards of Zhibaidihuang tablets. Method Micro?identification was used to identify Rhizoma dioscoreae and Cortex moutan； and HPLC was used to assay loganin and paeonol.Results Rhizoma dioscoreae and Cortex moutan can be identified by micro?identification. Loganin and paeonol showed good linearities over the ranges of 4.62-92.32 and 5.12-102.50 μg/mL with the average recoveries of 99.69% (RSD=1.70%) and 97.78%(RSD=1.80%), respectively. Conclusin This quality control method can be used for qualitative identification and quantitative assay of Zhibaidihuang tablets.
Key words:Zhibaidehuang tablets; Micro?identification; HPLC; loganin; paeonol
知柏地黄片由知母、黄柏、山茱萸、牡丹皮、熟地黄、泽泻、茯苓、山药等八味药材组成，收载于卫生药品标准中，具有滋阴降火的功效，用于治疗阴虚火旺、潮热盗汗、口干咽痛、耳鸣遗精、小便短赤等〔1〕。该标准中包括了茯苓、山茱萸的显微鉴别，黄柏与牡丹皮的薄层色谱鉴别。为了提高药品标准而加强药品质量的控制，本文增订了山药、牡丹皮的显微鉴别，并对方中山茱萸中所含有效成分马钱苷及牡丹皮中所含有效成分丹皮酚〔2〕进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
OLYMPUS生物显微镜CX31，岛津 LC?2010A HT高效液相色谱仪， HU10300F2型超声波清洗器。
1.2 试药
马钱苷对照品（批号: 111640-200502 ）、丹皮酚对照品（批号：110766-200416）均由中国药品生物制品检定所提供；知柏地黄片（广东益和堂制药有限公司，批号：GC001、GC002、GC003），阴性对照（广东益和堂制药有限公司）；乙腈为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2．1 山药的显微特征
显微鉴别方法能快速、准确地检出山药的显微特征：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40 μｍ，脐点短缝状或人字状;草酸钙针晶成束存在于壁细胞中或散在,见图1。
2． 2 牡丹皮的显微特征
显微鉴别方法能快速、准确地检出牡丹皮的显微特征：草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行，见图2。
3 含量测定
3．1 色谱条件
马钱苷：色谱柱为DiamonsilTM(钻石) C18 （5 μm，250 mm×4.6 mm）,柱温：40 ℃，流动相：四氢呋喃?乙腈?甲醇?0.05%磷酸溶液（体积比1∶7∶3∶89），流速：1.0 mL/min，检测波长：236 nm，进样量：10 μL。
丹皮酚：色谱柱为DiamonsilTM(钻石) C18 （ 5 μm，250 mm×4.6 mm）,柱温：室温，流动相：甲醇?水（体积比70∶30），流速：1.0 mL/min，检测波长：274 nm，进样量：20 μL。
3．2 系统适应性
3．2．1 对照品溶液的制备
取马钱苷对照品适量，精密称定，加体积分数50%的甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。
另取丹皮酚对照品适量，精密称定，加体积分数50%的甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。
3．2．2 供试品溶液的制备
取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数50%的甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用体积分数50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
3．2．3 阴性样品溶液的制备
取缺山茱萸或牡丹皮的阴性样品，按“3.2.2”项下方法制备得阴性样品溶液。
3．2．4 干扰试验
精密吸取各对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按上述条件进样分析，记录色谱图。结果阴性样品溶液色谱图均无干扰色谱峰，见图3,4。